HS™ Kit

HS™ Kit
规格价格：1 ml×5（200次，50 μl体系/次）286.00元  

产品简介

HS™  Kit包含2×浓缩PCR扩增预混和溶液（含有dNTP混合物、缓冲液等）和一支Taq DNA聚合酶。使用时，仅需将反应缓冲液与Taq DNA聚合酶按比例混合后，在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染（加样次数减少）同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。

HS™ Taq DNA聚合酶（高特异性Taq DNA聚合酶）是针对普通 Taq DNA聚合酶灵敏度高，易产生非特异性条带的情况，专门研制的高特异性嗜热DNA聚合酶产品。本产品的反应缓冲液的离子种类和浓度都经过改良，使得引物与模板的特异性结合力显著增强，从而提高引物与模板结合的严谨性，减少非特异性扩增。实验数据证明HS™ Taq DNA聚合酶能显著提高PCR扩增的特异性，降低背景，又能对长片段有较高的扩增效率。延伸速度为1min/kb（70~75℃，简单模板可达10s/kb）。该酶具有5'→3'聚合酶活性，无3'→5'外切酶活性。扩增产物具有3'-dA，可直接用于TA克隆。

产品组成

Component	KL3082P
2× HS™ Reaction Mix	1 ml×5
HS™ Taq DNA聚合酶（2.5U/μl）	160 μl

本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

活性定义

一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存条件

-20℃保存2年。

质量控制

纯度检测：经质量检测，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测：PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

应用举例

1. 配制反应体系

请于冰上配置反应体系，体系大小与组分用量与添加顺序可调整：

Ordinal	Component	Volume (50 μl reaction volume)	Final   concentration (50 μl reaction volume)
1	2× HS™ Reaction Mix	25 μl	1×
2	upstream primer (10 μM)[1]	2 μl	0.4 μM
3	downstream primer (10 μM)[1]	2 μl	0.4 μM
4	HSTM Taq DNA聚合酶（2.5U/μl）[2]	0.5-1 μl	1.25U-2.5U
5	template DNA[3]	1-4 μl	<1μg
6	超纯水[4]	To 50 μl	-
optional	MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[5]	Variable	-

[1] 引物终浓度建议范围：0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度，效率低时可提高浓度。

[2] 根据目的片段扩增的难易程度调整DNA聚合酶的用量。

[3] 不同模板最佳用量不同，部分DNA模板建议用量如下表（50 μl反应体系）。

Template	Dosage
人类基因组DNA	0.1μg-1μg
λDNA	0.5ng-5ng
大肠杆菌基因组DNA	10ng-100ng
质粒DNA	0.1ng-10ng

[4] 可单独订购超纯水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[5] 可单独订购25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2. 设定反应程序进行PCR反应

Stage	Temperature	Time	Number of Cycles
Initial Denaturation	94℃	3 min	1
Denaturation	94℃	30 sec	25-35
Annealing	55-68℃[1]	30 sec
Extension	72℃	Variable[2]
Final Extension	72℃	5-10 min	1

[1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

[2] 延伸时间按1min/kb来设最佳（简单模板可达10s/kb）。

3. 分析结果

反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要，可进行割胶回收。无产物或产物量少的改进措施有：1调整退火温度；2减少抑制剂的影响，如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分，需要高倍稀释（1:；10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脱，提高模板DNA的纯度；4使用PCR添加剂，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高产量。

操作注意事项

建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。

引物设计注意事项

引物长度一般在15-30个碱基之间；上下游引物3’末端避免互补，避免出现3个以上重复的G或C，或出现发夹结构，否则会产生非特异性扩增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量尽量接近；Tm值控制在55-65℃之间，且上下游引物Tm值尽量接近，额外附加序列（酶切位点、修饰等）是非模板匹配序列，不参与Tm值计算。