PCR Mix

PCR Mix
规格价格：（1ml）156.00元  
规格价格：（5 ml）650.00元
规格价格：（10ml）1040.00元  
规格价格：（50ml）3640.00元
规格价格：（100ml）5850.00元  

产品简介

PCR Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染（加样次数减少）同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端，可直接用于TA克。

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达10 kb（简单模板）。延伸速度为1min/kb（70-75℃，简单模板可达10s/kb）。该酶具有5'→3'聚合酶活性，无3'→5'外切酶活性。

产品组成

Component	KL2011P	KL2012P	KL2013P	KL2014P	KL2015P
2× PCR Mix	1 ml	1 ml× 5	1 ml× 10	1 ml× 50	1 ml× 100
超纯水	1 ml	1 ml× 5	-	-	-

本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

保存条件

-20℃保存2年。

质量控制

纯度检测：经质量检测，产品不含脱核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测：PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

应用举例

1. 配制反应体系

请于冰上配置反应体系，体系大小与组分用量与添加顺序可调整：

Ordinal	Component	Volume (50 μl reaction volume)	Final   concentration (50 μl reaction volume)
1	2× PCR Mix	25   μl	1×
2	upstream   primer (10 μM)[1]	2 μl	0.4   μM
3	downstream   primer (10 μM)[1]	2 μl	0.4   μM
4	template   DNA[2]	1-4   μl	<1μg
5	超纯水[3]	To   50 μl	-
optional	MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[4]	Variable	-

[1] 引物终浓度建议范围：0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度，效率低时可提高浓度。

[2] 不同模板最佳用量不同，部分DNA模板建议用量如下表（50 μl反应体系）。

Template	人类基因组DNA	λDNA	大肠杆菌基因组DNA	质粒DNA
Dosage	0.1μg-1μg	0.5ng-5ng	10ng-100ng	0.1ng-10ng

[3] 可单独订购超纯水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[4] 可单独订购25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2. 设定反应程序进行PCR反应

Stage	Temperature	Time	Number   of Cycles
Initial   Denaturation	94℃	3   min	1
Denaturation	94℃	30   sec	25-35
Annealing	55-68℃[1]	30   sec
Extension	72℃	Variable[2]
Final   Extension	72℃	5-10   min	1

[1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

[2] 延伸时间按1min/kb来设最佳（简单模板可达10s/kb）。

3. 分析结果

反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要，可进行割胶回收。

无产物或产物量少的改进措施有：1调整退火温度；2减少抑制剂的影响，如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分，需要高倍稀释（1: 10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脱，提高模板DNA的纯度；4使用PCR添加剂，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高产量。

操作注意事项

1 室温下Taq DNA聚合酶有一定的活性，为避免发生非特异性扩增，请于冰上配置反应体系，并且最后添加模板DNA。

2 Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的脱腺嘌，可直接用于T隆。

3 碱基错误率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10^-5。

引物设计注意事项

引物长度一般在15-30个碱基之间；上下游引物3’末端避免互补，避免出现3个以上重复的G或C，或出现发夹结构，否则会产生非特异性扩增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量尽量接近；Tm值控制在55-65℃之间，且上下游引物Tm值尽量接近，额外附加序列（酶切位点、修饰等）是非模板匹配序列，不参与Tm值计算。