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Protein A免疫沉淀磁珠试剂盒

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  • 上海一研
  • EY-24421
  • 进口、国产
  • 2025年07月15日
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    • 英文名

      Protein A Immunoprecipitation Kit

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海一研

    • 保存条件

      低温

    • 规格

      20次/100次

    以下是细胞生物学试剂的详细介绍:
    产品细节图片1
      中文名称:Protein A免疫沉淀磁珠试剂盒  
    英文名称:Protein A Immunoprecipitation Kit

    产品规格:20次/100次
    发货周期:1~3天
    产品简介:
    Protein A/G Matrix免疫沉淀磁珠及试剂盒系列产品是利用纳米表面技术使Protein A/G高密度定向包被到超顺磁性微球表面,与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比,该产品具有更多的抗体结合位点,磁珠使用量更少,非特异性结合率低,可便捷高效地进行免疫沉淀实验。每毫升免疫沉淀磁珠结合Human IgG的能力可达到300μg以上,单个沉淀反应仅需25μL磁珠即可完成检测。微米级磁珠提供的超大比表面积,大幅缩短抗体与抗原吸附所需的平衡时间,15 min内即可完成抗体吸附过程,30 min内完成抗原沉淀操作。简短的操作时间避免长时间操作造成目标蛋白水解,保证了目标蛋白的活性及蛋白复合物的完整性。
    免疫沉淀磁珠试剂盒配有经过优化预制的缓冲液,为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件,增强了免疫沉淀实验的稳定性。
    本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。操作者可以参考本操作说明书,附表1的数据了解不同种属来源及亚型的抗体与Protein A磁珠、Protein A/G的结合能力。
    储存条件:2~8℃保存
    保存期:1年
    注:磁珠结合Human IgG能力(Antibody Capacity)分别为:Protein A:0.4~0.5 mg/mL; Protein A/G:0.5~0.6 mg/mL
    操作流程:
    1. 抗原样品制备:本操作说明书提供以下四种样品处理方法,建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理,使待检测抗原释放至样品溶液中。
    血清样品处理:若目标蛋白丰度较高,建议用结合缓冲液(②)稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10~100 μg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
    悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃,500 g,10 min),弃上清后称重,按每毫克细胞50 μL的比例用1× PBS(③)洗涤2次;按每毫克细胞5~10 μL的比例加入结合缓冲液(②),同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM 的PMSF),混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃,14000 g,10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
    贴壁细胞样品处理:移去培养基,按每1.0×105个细胞150 μL的比例用1×PBS(③)洗涤两次;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5 mL EP管内,按每1.0×105个细胞20~30 μL 的比例加入结合缓冲液(②),同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的PMSF),混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃,14000 g,10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
    大肠杆菌样品处理:离心收集大肠杆菌(4℃,12000 g,2 min),弃上清后称重,按每克(湿重)菌体 10 mL的比例用1×PBS(③)洗涤2次;按每克(湿重)菌体5~10 mL的比例加入结合缓冲液(②),同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM 的PMSF),重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4℃,17000 g,10 min)。
    2. 磁珠预处理:将免疫沉淀磁珠(①)漩涡振荡1 min,使磁珠充分振荡重悬;取25~50 μL磁珠悬液置 于1.5 mL EP管中。加入200 μL 结合缓冲液(②)洗涤,进行磁性分离[将EP管放置于磁性分离器(⑦)上,使磁珠被吸附在管壁至溶液澄清;该操作描述以下省略],弃上清液,从磁性分离器上取下EP管,重复洗涤一次。最后加入200 μL 结合缓冲液(②)重悬磁珠以备用。
    3. 抗体结合反应:
    抗体工作液的制备:用结合缓冲液(②)稀释抗体样品,配制成终浓度为5~50 μg/mL抗体工作液,置于冰上备用。
    抗体吸附:将步骤2预处理的磁珠悬液进行磁性分离,弃上清液;加入200 μL抗体工作液,迅速重悬后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管,15 min后进行磁性分离,收集上清液置于冰上以备后续检测。
    洗涤:向EP管中加入200 μL 结合缓冲液(②)洗涤,用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体复合物均匀分散,然后进行磁性分离,弃上清液,从磁性分离器上取下EP管。重复以上洗涤操作一次。
    4. 抗体交联反应 (备选):如操作者需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱,请忽略本步骤,进行步骤5。
    本步骤适用于操作者需要单独洗脱目标抗原的试验,推荐使用BS3(Thermo Scientific,Cat. #21580)作为交联剂,相关实验请参照该试剂的操作说明。
    5. 抗原沉淀反应
    抗原吸附:加入200 μL步骤1中制备的抗原样品,用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管10 min,使抗原与抗体充分结合,如结合力较弱则可在室温下反应1 h或者在4℃下反应过夜。
    洗涤与转移:将上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离,收集上清液置于冰上以备后续检测。向EP管中加入200 μL 洗涤缓冲液(④)洗涤,用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,弃上清液;从磁性分离器上取下EP管,再重复洗涤两次。最后加入 200 μL 洗涤缓冲液(④),用移液器将磁珠-抗体-抗原复合物悬液转移至新的1.5 mL EP管中*,并执行磁性分离,移弃上清。
    (*注:抗原洗脱前务必将磁珠转移到新的EP管,避免将管壁上原有的非特异性吸附蛋白一起洗脱。)
    6. 抗原洗脱:本操作说明书提供以下两种抗原洗脱方案,操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。
    变性洗脱法:此法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。从磁性分离器上取下EP管,向其中加入25 μL 1× SDS-PAGE Loading Buffer(自备)混合均匀,95℃加热5 min。然后执行磁性分离[也可以使用离心的方式(室温下13000 g,10 min)] 收集上清液进行SDS-PAGE检测。
    非变性洗脱法:此方法洗脱的样品保持原有的生物活性,可用于后期功能分析。从磁性分离器上取下EP管,向其中加入20 μL 洗脱缓冲液(⑤)混合均匀,室温孵育10 min。然后执行 磁性分离[也可以使用离心的方式(4℃,13000 g,10 min)],收集上清液至新的EP管,并立即加入1.0 μL中和缓冲液(⑥)将洗脱产物pH调节至中性,用于后期功能分析。
    注意事项:
    1. 进行免疫沉淀操作之前,请务必认真阅读本操作说明书。
    2. 本产品须与磁性分离器配套使用。
    3. 磁珠使用前应充分振荡均匀。
    产品细节图片2
    Protein A免疫沉淀磁珠试剂盒 细胞生物学研究有以下几个方面:
    细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
    ①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
    ②生物膜与细胞器的研究;
    ③细胞骨架体系的研究;
    ④细胞增殖及其调控;
    ⑤细胞分化及其调控;
    ⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
    ⑦细胞的起源与进化;
    ⑧细胞工程.
    细胞生物学研究的常用技术有哪些:
    1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
    2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
    3.细胞工程:细胞培养。
    注意事项:
    1. 本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试本试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,为取得良好的使用效果,*次解冻后可适当分装保存。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。
    2. 检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。
    3. 使用说明中提供了检测ATP标准品的方法,实际检测细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。

    产品细节图片3
    MAP4K5 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
    SPIRE1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
    DALRD3 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
    CALB1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
    GPRASP2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
    TCF25 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
    NFAT5 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
    EPHA7 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
    CPNE3 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
    CADM3 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
    TRIM39 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
    ARSF rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
    ARNTL rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
    SOX1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
    AMZ2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
    Isoleojaponin苏木色精,苏木素  分子式:C30H48O4  性状:Powder  纯度:97.5%

    10,11-Dihydro-24-hydroxyaflavinine核苷酸5’-一磷酸腺苷钠盐;AMP钠盐  分子式:C30H46O3  性状:Powder  纯度:97.5%
    TaxcultineCTP.Na2;胞苷-5’-三磷酸二钠盐  分子式:C32H48O4  性状:Powder  纯度:95.0%
    Cabazitaxel intermediate5-甲基尿苷  分子式:C33H54O2  性状:Powder  纯度:93.5%
    Vitexolide D2,2’-脱水尿苷;环尿苷  分子式:C30H48O2  性状:Powder  纯度:%
    15,16-Epoxy-15-ethoxy-6β,13-dihydroxylabd-8-en-7-oneX-gal;5-溴-4氯-3吲哚基β-D半乳糖  分子式:C30H46O3  性状:Powder  纯度:%
    Aflavazole荧光胺  分子式:C30H50O3  性状:Powder  纯度:%
    6α-Hydroxyhispanone4-氯-1-萘酚(4C1N)  分子式:C30H50O2  性状:Powder  纯度:97.0%
    20-Hydroxyaflavinine亲和素;卵白素来源于鸡蛋白  分子式:C32H52O2  性状:Cryst.  纯度:98.5%
    Protein A免疫沉淀磁珠试剂盒 中文名称  富含脯氨酸蛋白11抗体

         Proline rich protein 11; PRR-11; PRR 11; PRR11_HUMAN.
         1mg/1ml
     0.2ml/200μg
    抗体来源  Rabbit
    克隆类型  polyclonal
    交叉反应  Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Sheep
    产品类型  一抗
    研究领域  肿瘤 信号转导 肿瘤细胞生物标志物
    蛋白分子量  predicted molecular weight: 40kDa
         Lyophilized or Liquid
     KLH conjugated synthetic peptide derived from human PRR11
         IgG
    纯化方法  affinity purified by Protein A
     Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
    产品应用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500
    (石蜡切片需做抗原修复)
    not yet tested in other applications.
    optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
    保存条件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
    Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

     

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      ,包括抗体的选择、用超声波剪切染色质的条件和免疫沉淀DNA的分析。Active Motif公司的ChIP-IT Kit完全地解决了所有这些与ChIP方法有关的潜在的问题。Active Motif ChIP-IT Kit含有ChIP分析的25个反应所需的所有试剂。另外,这种试剂盒还备有一个详细的指南――为实验方案的优化节约了时间。指南中的方案容易遵循,甚至是对于新手也是如此。ChIP-IT试剂盒的最大的优点是同时具备正向(anti-TFIIB)和负向(negative IgG)对照抗体。 美国

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