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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
28
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海一研
- 保存条件:
低温
- 规格:
1盒
中文名称:ECM Kit(大鼠IgG)
英文名称:
产品规格:1盒
发货周期:1~3天
用途:适于一抗为大鼠IgG的Western Blotting 检测。
保存条件:4℃可保存一年 。
Western Blotting 检测试剂盒内容:
1.封闭试剂:10g 蛋白质干粉(脱脂奶粉)。
2.HRP 标记兔抗大鼠IgG:0.1ml 亲和纯化抗体,经过人血清吸附以去除交叉抗体。效价 1:2000-10000。
3.ECM 显色剂:总量 100ml。含 A 液 5ml(×20倍);B 液 5ml(×20倍)。每个试剂盒足够 10 张小膜或800 c㎡面积的膜显色
工作原理:
蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下 ,向着与其电荷相反的电极移动的现象。根据所采用的支持物不同,可分为:琼脂糖凝胶电泳、淀粉凝胶电泳、聚凝胶电泳等。其中以聚胺凝胶电泳(PAGE)最广泛。它的优点为:无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出 10-9-10-12mol的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶。SDS-PAGE 是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式,它根据蛋白分子大小不同,迁移速率的不同而达到分离目的,特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。
免疫印迹是将凝胶电泳的高分辨力和免疫化学检测的特异性融为一体。免疫印迹技术首先借助凝胶电泳将蛋白质抗原分离,然后将凝胶中的蛋白质转印到膜上使之成为被分离的一个拷贝。免疫印迹为检测样品中是否存在目的蛋白提供一种可靠的方法,该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特异性抗体结合的特性并通过相对迁移率来体现该蛋白的分子量。如果想要了解样品中是否存在某一抗原,以及该抗原的含量或该抗原多肽链的相对分子质量以及亚型,是否与其他蛋白结合,蛋白质的酪氨酸残基是否发生磷酸化等有关问题均可采用免疫印迹。
免疫印迹包括多个简单步骤,可在一到两天完成,该方法具有高效,简便,灵敏等特点。
实验操作步骤:
1.蛋白质的样品制备:
1)细胞培养蛋白质样品的制备:
1:胰酶消化后裂解:细胞培养至 80%左右密度时,以含 0.25%胰蛋白酶消化,室温,低速离心,弃上清。细胞经预冷的PBS 漂洗3次,加入 0.1-1ml 裂解液(根据细胞数量定)反复吹打。
2:皿上直接裂解:细胞培养至 80%左右密度时,细胞经预冷的PBS 漂洗3次,加入 0.1-1ml 裂解液(根据细胞数量定),用细胞刮刀收集,转移至离心管中,反复吹打。
2)组织样品的制备:新鲜组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,按组织净重:裂解液=1:10的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆,离心收集上清(如有粘稠物可超声处理)
3)蛋白变性:处理后的样品加入样品缓冲液(按样品浓度 1:1或1:2的比例)混匀,样品置 1000C的水浴箱加热 3-5分钟,10000g 离心 10分钟,取上清液。(样品可立即使用也可以分装冻存,-20℃可稳定保持数月。)
2.SDS-PAGE 电泳:
1).制 胶:①按比例配制分离胶(丙胺母液:单体:双体=29:1),缓缓地摇动溶液,使激活剂混合均匀,将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中,再在液面上小心注入一层水或正丁醇,以阻止氧气进入凝胶溶液中,37℃恒温箱中静置 60min。
②同前按比例配制浓缩胶,但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多的氧气。吸去不连续系统中下层分离胶上的水分,以连续平稳的液流注入凝胶溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡,37℃恒温箱中静置60min 以上以保证完全聚合。
2)加 样:依次加入标准品和待分析样品。(加样时间要尽量短,以免样品扩散,可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。样品一般在 1.0mm 厚的胶 加样 50-100ug/lane)。
3)电 泳:加样完毕,选择适当的电压进行电泳即可。一般采用恒压浓缩胶 55V,分离胶 75V,电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处,即停止电泳。
3.转 膜:蛋白质经 SDS-PAGE 分离后,从凝胶中转移到固相支持物上,常用的支持物有:硝酸纤维膜即 NC 膜(AR0135)或PVDF 膜。Tris/甘氨酸-SDS-PAGE 结束后,取出凝胶,在 Tris/甘氨酸缓冲液中漂洗数秒。蛋白质从凝胶向膜转移的过程普遍采用电转印法,包括湿式电转印和干式电转印。
1)干式电转印:将转印槽阴极平放工作台上,并在上面加三张电转印液浸透的1mm厚的滤纸,将电转印液浸透 0.45μm的N.C 膜放在滤纸上,再将凝胶平放在 N.C 膜上,最后在凝胶上加盖三层电转印液浸透 1mm 厚的滤纸,电流根据凝胶面积按 1-2 mA/cm2,接通电源,经 1-1.5 小时电转印。
2)湿式电转印:打开电转印夹,每侧垫上一块专用的用转印液浸泡透的海面垫,再各放三块转印液浸透的滤纸,滤纸与海面垫大小相同或与 NC 膜、凝胶大小相同均可,将凝胶平放在阴极侧滤纸上,最后将 NC 膜平放在凝胶上,按照(-)夹板-海棉-滤纸-胶块-NC 膜-滤纸-海绵-夹板(+)装好,依次除尽每层间气泡,夹好电转印夹。 电泳槽加满预冷电转印液,插入电转印夹,将电泳槽放入冰箱内,连接好电极,接通电流,转印夹的NC 膜应对电泳槽的正极,4℃ 250-300mA,转印 80min(根据
分子量不同,转印时间可适当调整)。
4、膜的封闭:漂洗转印膜,室温,3次 x10min,以尽量洗去转印膜上的SDS(以免影响抗体的结合),放入 0.02M TBS 缓冲液配置的5%脱脂奶粉和 1%的BSA 混合的封闭液内,摇床摇动,室温封闭 2h或4℃过夜。1×TBS-T ,PH7.6洗
液,室温漂洗10min。
5、抗体杂交:1)封闭后的杂交膜放入杂交袋中,加入用 0.02M TBS 缓冲液配置的2%脱脂奶粉和 1%的BSA 混合的稀释液适当稀释的适当稀释的一抗,4℃孵育过夜或37℃孵育2h,1×TBS-T ,PH7.6洗液洗膜 3次 x10min。(一抗的稀释度,孵育时间,温度与显色强度,背景有直接关系。一般来说,阳性不强时可提高一抗浓度和延长孵育时间,而背景高,非特异性条带多,则降低抗体浓度和孵育时间)。
2)用 0.02M TBS 缓冲液配置的2%脱脂奶粉和 1%的BSA 混合的稀释液适当稀释过氧化物酶标记兔抗大鼠IgG 孵育膜,20℃-37℃,1.5 小时或4℃过夜,1×TBS-T洗膜 3×10min。
6、显色(ECM)
ECM Kit(大鼠IgG) 细胞生物学研究有以下几个方面:
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;
⑧细胞工程.
细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
注意事项:
1. 本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试本试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,为取得良好的使用效果,*次解冻后可适当分装保存。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。
2. 检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。
3. 使用说明中提供了检测ATP标准品的方法,实际检测细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。
OTC rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
NDUFA6 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
SMARCA2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
EPHA6 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
SPN rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
NDUFA5 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
NAT10 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
CENPU rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
KLRB1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
CKAP2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
EEF1E1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
CEND1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
TAB3 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
IL2RB rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
TRPM8 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
Withaperuvin C芪偶氮 分子式:C44H70O14 性状:Powder 纯度:98.0%
Otophylloside O荧光镓试剂(>98.0%(T)) 分子式:C30H48O6 性状:Powder 纯度:96.5%
Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside浴酮灵二磺酸二钠盐 分子式:C29H48O4 性状:Powder 纯度:97.5%
Otophylloside F水合红菲绕啉二磺酸钠水合物 分子式:C59H96O26 性状:Powder 纯度:98.0%
Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside浴铜灵 (升华提纯)(>99.0%(HPLC)(T)) 分子式:C30H48O4 性状:Powder 纯度:95.0%
Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside红菲绕啉(升华提纯)(>99.0%(HPLC)(T)) 分子式:C39H54O8 性状:Powder 纯度:97.0%
Withaphysalin E浴铜灵(>98.0%(T)) 分子式:C30H52O4 性状:Powder 纯度:98.5%
Withaphysalin S新亚铜试剂半水合物(>98.0%(T)) 分子式:C38H56O13 性状:Powder 纯度:95.0%
Physaminimin C红菲咯啉(>99.0%(T)) 分子式:C32H46O8 性状:Powder 纯度:98.0%
ECM Kit(大鼠IgG) 中文名称 PDZ结构域PDZK4蛋白抗体
别 名 FERM and PDZ domain containing protein 2; PDZ domain containing protein 4; PDZ domain containing protein 5C; PDZ domain containing 4 PDZD5C; PDZK4; PDZK5C;FRPD2_HUMAN.
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Rabbit, Sheep
产品类型 一抗
研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 信号转导
蛋白分子量 predicted molecular weight: 144kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human PDZK4
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:50-200
(石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
保存条件 Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Important Note This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
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文献和实验, even for a novice. The biggest advantage of the ChIP-IT kit is that it contains both positive (anti-TFIIB) and negative (negative IgG) control antibodies for the ChIP. This feature enables the user to determine if results are due to ChIP or the antibody
Reprogramming Fibroblasts with the CytoTune-iPS Reprogramming Kit
15. DPBS Without Calcium or Magnesium 16. TRIzol® LS Reagent 17. SuperScript® VILO™ cDNA Synthesis Kit 18. AccuPrime™ SuperMix I 19. Mouse Anti-Tra1-60 Antibody 20. Mouse Anti-Tra1-81 Antibody 21. Mouse Anti-SSEA
A c-Kit (2B8) FITC-IgG2b, 01904D FITC-IgG2b Isotype control, 11184C Fc RII block (clone 2.4G2), 01241D Media: Heat inactivated FBS (56°C x 30 min) PBS + 2% heat-inactivated
技术资料暂无技术资料 索取技术资料










