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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
25
- 英文名:
DAB chromogenic reagent kit For Western Blotting(with)
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海一研
- 保存条件:
低温
- 规格:
1盒
中文名称:Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝色)(兔IgG)
英文名称:DAB chromogenic reagent kit For Western Blotting(with)
产品规格:1盒
发货周期:1~3天
工作原理:聚合标记法是一种酶标记方法,其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于 Western Blotting的免疫学检测,更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗,更重要的是使条带更清晰,甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB 是过氧化物酶最重要的显色剂之一,反应产物为不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物,适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方,具有操作简单,储存稳定,信号灵敏度高,持续时间长,背景低,结果易保存等优点。
保存条件:-20℃冷冻保存。DAB 显色试剂应避光保存。
有效期:一年。
试剂盒的内容:
(1)封闭试剂:10 g 蛋白干粉×1 包。
(2)浓缩抗体稀释液:20 ml×1 瓶,为10倍浓缩液。
(3)过氧化物酶标记山羊抗兔IgG,效价 1:200-400。
(4)DAB 显色试剂,含
显色剂 A:DAB×40倍浓缩液,3ml。
显色剂 B:H2O2×40倍浓缩液,3ml。
显色剂 C:×40倍 TBS 浓缩缓冲液(含氯镍),3ml。
使用说明 需要而未提供的试剂和器材:
1.转印了蛋白样品的NC 膜或PVDF 膜:通过 SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白质抗原,将 PAG 胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。
2.稀释缓冲液:使用中性稀释缓冲液即 0.02 M PBS或0.02M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6):1000 ml 蒸馏水加 Na2HPO4 2.8 g ,NaH2PO4 0.4 g,NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸盐,应加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6):1000ml 蒸馏水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 纯乙酸或浓盐酸调节 pH 值(7.2-7.6)。
3.洗涤缓冲液:每 1000ml 中性稀释缓冲液中加入 0.5 ml Tween20 即可。
4.一抗:选择适合的一抗,用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml,具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。
5.摇床:膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃,需在摇床上操作。
6.相机:记录结果。
操作程序:
1.通过聚丙胺凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。
2.将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或PVDF 膜上。
3.封闭硝酸纤维膜:用封闭蛋白干粉 2 g,加稀释缓冲液 100 ml,20-37℃封闭 1-2 小时。用量以浸没整张膜为准。
4.用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜 5分钟,1次。
5.配制抗体稀释液:取 90 ml 稀释缓冲液加 1 g 封闭蛋白干粉和 10 ml浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。
6.硝酸纤维膜孵育一抗:用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体浓度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强,应提高一抗的浓度;如果有非特异性的条带,应提高一抗的稀释度。
7.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜 3次,每次 5分钟。
8.硝酸纤维膜孵育二抗:用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗,效价 1:200-400。37℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染色情况对稀释度做适当调整。
9.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜 4次,每次 5分钟。
10.DAB 显色:使用 DAB 显色试剂。按每 2 ml 蒸馏水加显色剂 A,B,C 各1滴,混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色 1-30分钟。
若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
11.观察,照相。
Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝色)(兔IgG) 细胞生物学研究有以下几个方面:
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;
⑧细胞工程.
细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
注意事项:
1. 本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试本试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,为取得良好的使用效果,*次解冻后可适当分装保存。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。
2. 检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。
3. 使用说明中提供了检测ATP标准品的方法,实际检测细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。
YPEL3 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
CRABP2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
SLC5A8 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
CRADD rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
ID4 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
SLC16A14 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
PILRB rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
PNPO rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
HMGCS2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
DDIT4L rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
ZNF512 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
ZNF34 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
ZNF213 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
FGFR1OP2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
NEK10 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
Herbaridine B6,7-亚甲二氧基-4-甲基-3-马来酰亚胺香豆素(>98.0%(HPLC)(N)) 分子式:C30H46O3 性状:Powder 纯度:98.0%
Shiraiachrome A4-甲基-6,7-亚甲基二氧代香豆素(>99.0 %(GC)) 分子式:C35H52O6 性状:Powder 纯度:98.0%
Hypocrellin A7-甲氧基香豆素-3-羧酸(>98.0%(GC)(T)) 分子式:C38H56O14 性状:Oil 纯度:%
Shikonin溶剂绿 7(>85.0%(E)) 分子式:C35H52O6 性状:Powder 纯度:98.0%
Triptoquinone A磺酰荧光素(>75.0%(HPLC)(T)) 分子式:C30H42O8 性状:Powder 纯度:98.0%
2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinoneN-琥珀酰亚胺基-7-羟基香豆素-3-羧酸酯(>95.0%(HPLC)(T)) 分子式:C30H50O 性状:Powder 纯度:98.5%
Rubioncolin CN-琥珀酰亚胺基-7-甲氧基香豆素-3-羧酸酯(>98.0%(HPLC)(N)) 分子式:C32H46O9 性状:Powder 纯度:97.0%
Taxoquinone5-(2-氨乙基氨基)-1-萘磺酸钠水合物(>98.0%(HPLC)) 分子式:C40H56O15 性状:Powder 纯度:98.0%
Danshenxinkun A四溴荧光素钾盐(>85.0%(HPLC)) 分子式:C28H40O7 性状:Powder 纯度:98.0%
Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝色)(兔IgG) 中文名称 吡哆醛激酶抗体
别 名 PDXK.1; pdxK; PDXK_HUMAN; PKH; PNK; Pyridoxal kinase; Pyridoxamine kinase; Pyridoxine kinase; Vitamin B6 kinase.
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Horse
产品类型 一抗
研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 信号转导
蛋白分子量 predicted molecular weight: 35kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human PDXK
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:50-200
(石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
保存条件 Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Important Note This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
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文献和实验分别为0,10,20,30,40,50ug/ul): 1 2 3 4 53 6 G250 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 0.5mg/ml BSA ------ 20ul 40ul 60ul 80ul 100ul ddH2O 100ul 80ul 60ul 40ul 20ul ----- 待测蛋白配液:每管3ml G250,2ul样品,98ul ddH2O。(若加入样品后,液体没有变蓝色
。 BSA标准液:0.5mg/ml BSA, 双蒸水配制。 配制标准液(浓度分别为0,10,20,30,40,50ug/ul): 1 2 3 4 53 6 G250 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 0.5mg/ml BSA ------ 20ul 40ul 60ul 80ul 100ul ddH2O 100ul 80ul 60ul 40ul 20ul ----- 待测蛋白配液:每管3ml G250,2ul样品,98ul ddH2O。(若加入样品后,液体没有变蓝色
----- 待测蛋白配液:每管3ml G250,2ul样品,98ul ddH2O。(若加入样品后,液体没有变蓝色,则可再加2ul样品,ddH2O减为96 ul,标准液浓度可适当扩大。) 紫外分光光度计,595nm,用1号管调零,制出标准曲线, 标准方程及R值(R值应大于0.99, 否则操作误差较大),测量待测蛋白OD值,算出蛋白浓度。(若加入2ul样品,则浓度值需除2,方为真正浓度; 若加4ul样品,则除4) 聚丙烯酰胺电泳: 1.自来水,洗涤剂清洗玻璃板,用ddH
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