热启动Taq DNA聚合酶北京厂家

特别提示：包括热启动Taq DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：热启动Taq DNA聚合酶
产品货号：CZ034
产品规格：250U/1000U

产品简介：
HotStart Taq DNA聚合酶是一种创新型的抗体修饰的热启动酶。该酶在室温下活性被完全封闭，避免了在样品准备及第一循环反应升温阶段产生非特异性扩增和引物二聚体，增加了DNA扩增的特异性。加热到70℃时，结合在酶上的抗体迅速失活，且不会影响之后的Taq DNA聚合酶反应。
使用抗体的热启动法，与化学修饰热启动法不同，无需长时间的变性步骤，具有在第一循环的变性步骤中即可完全失活的优点，该酶具有特异性好、灵敏度高、重复性好、扩增效率高等优点。
单位定义：
70℃条件下，30分钟内将10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)合成多聚核苷酸所需的酶量定义为1个活性单位。
失活或抑制：
1．低浓度的尿素、甲酰胺、二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜(DMSO)对Taq DNA聚合酶的活性无抑制。
2．较高浓度的非离子表面活性剂如Tween-20、NP-40和Triton X-100(＞5%)能抑制Taq DNA聚合酶的活性。
3．极低浓度的离子表面活性剂如脱氧胆氨酸钠(＜0.06%)，十二烷基肌氨酸钠(＜0.02%)，十二烷基硫酸钠(SDS，＜0.01%)几乎完全抑制Taq DNA聚合酶活性。
4．酚/氯fǎng抽提可使Taq DNA聚合酶丧失活性。
操作说明：
1．PCR各组分在冰上完全融化并充分混匀，最后加入Taq DNA聚合酶，以减少引物二聚体和非特异性条带的产生(加样操作均在冰上完成)。以50μL反应体系为例，按照下表进行加样：
组分 加入体积 终浓度
10×HotStart Standard Reaction Buffer(含20mM Mg2+) 5μL 1×
25mM MgCl2 Variable 1.5～2.0mM
10mM dNTP 1μL 0.2mM
Primer F(10μM) Variable 0.2～1μM
Primer R(10μM) Variable 0.2～1μM
Template DNAa Variable 10pg～1μg
HotStart Taq DNA polymerase(4U/μL) Variable ＜3Kb(～1.25U)
3～6Kb(2.5～5U)
ddH2O Up to 50μL
a.不同类型的DNA模版，在50μL反应体系中的推荐用量为哺乳动物基因组DNA：0.1～1μg；大肠杆菌基因组DNA：10～100ng，质粒DNA：0.1～10ng。
2．推荐PCR程序如下表：
步骤 温度 时间 循环数
预变性a 94℃ 5min 1
变性 94℃ 30s 30
退火b 52～72℃ 30s
延伸c 72℃ 1～2Kb/min
末期延伸d 72℃ 10min 1
a.对于高GC含量或复杂二级结构的模版，可以适当延长预变性时间至5～10min。
b.根据引物与模版的特性，退火温度可在52℃～72℃之间进行调整。
c.在扩增小于2Kb片段时，其扩增速率为2Kb/min，当扩增大于2Kb片段时，其扩增速率为1Kb/min。
d.如需将PCR产物直接用于TA克隆，可将最后的延伸时间设定为30min。
注意事项：
1.请将需要预混的全部组分配制成PCR混合物后使用，以降低加样误差。
2.使用的PCR仪如无加热盖，推荐在PCR样品上方覆盖少量矿物质油。

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