大豆源性成分荧光PCR检测试剂盒(探针法)

特别提示：包括大豆源性成分荧光PCR检测试剂盒(探针法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：大豆源性成分荧光PCR检测试剂盒(探针法)
英文名称：Soy Endogenous qPCR Kit（Probe Method）
产品货号：BTN11-180402
产品规格：50次

大豆是常见的农作物，很多时候需要通过检测大豆专一性内源基因的存在来判断某些食品中是否含有大豆成分或添加剂。本产品即是基于基因荧光探针PCR法的大豆Lectin基因的快速检测试剂盒，适用于样品中大豆源性成分的快速检测。

产品特点：
1. 灵敏度高，分析灵敏度可以达到50拷贝/uL，远高于常规方法，也比常规的PCR检测高100倍。
2. 特异性高，根据大豆Lectin基因的保守区设计引物，不会误检。
3. 一管封闭式，避免了PCR产物对后续PCR的污染。
4. 线性范围广，在10-107拷贝/uL的靶分子浓度范围内均呈线性。
5. 简单快捷，只需要2小时即可得到实验结果。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
即用型qPCR Mix，2×	BTN90408	750μl
Lectin专一性引物对（25uM each）	Yw14271428	100μl
Lectin阳性对照片段（10E10拷贝/uL）	Yw14291430	10μl
Lectin专用探针（5.4nM，5FAM-3HBQ1）	T11-180402	25μl（棕色）
超纯水	BTN100935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：样品等

使用方法：

一、样品DNA的制备
用自选方法纯化需要检测样品的DNA，也可以另购本公司的柱式植物DNA提取试剂盒（BTN60602），跟本试剂盒兼容。

二、制备Lectin阳性片段的不同稀释样品（以制备10-10E6这6个10倍稀释度为例。先将对照从10E10稀释到10E7 拷贝/uL。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记6个离心管，分别为1,2,3,4,5和6号。
2. 用带芯分别加入45μl超纯水（zuì好用带芯枪头，下同）
3. 在6号管中加入5μl 浓度为10E7的Lectin阳性片段，充分震荡1分钟。
4. 换枪头，从6号管中取5μl溶液到5号管中，充分震荡1分钟。
5. 换枪头，从5号管中取5μl溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的样品。1-6号管中阳性对照片段的浓度分别为10E1到10E6拷贝/uL。
6. 从6个管中分别取5μl进行定量PCR（见下步），每个样品zuì好重复3次。

三、荧光定量PCR反应（30μl体系）
在PCR管中加入下列成分（每个样品zuì好重复三次，这里只列出一次）：

成份	样品	6个阳性对照 稀释梯度	阴性对照
Lectin专一性引物对	2μl	2μl	2μl
Lectin专一性探针	0.5uL	0.5uL	0.5uL
样品DNA（自备）	5μl	无	无
Lectin阳性对照	无	5μl（每个管加一 个稀释度的对照）	无
补超纯水到			15μl
即用型荧光PCR Mix	15 μL	15μl	15μl

轻柔混匀后上机，按下面参数进行定量PCR，反应参数如下：

过程	温度	时间	说明
预变性	94℃	2分钟
PCR反应 (40个循环)	94℃	15s
	60℃	15s
	72℃	35s	采集数据

注意：仪器将检测扩增产物与探针杂交所产生的荧光信号，获取数据。
荧光通道选择：检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。

四、数据处理：
以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的log为横轴，以Ct值为纵轴，通过待测样品的Ct值计算出样品DNA的浓度。

除了大豆源性成分荧光PCR检测试剂盒(探针法)，我公司还供应以下相关产品：



名称：羊源性成分单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA291
规格：48次/盒

名称：鸭源性成分单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA292
规格：48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对鸭源性成分特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR技术对鸭源性成分DNA进行体外扩增检测。本试剂盒中鸭源性成分的探针报告基团为FAM。

二、用途
该试剂盒适合于各种饲料及其它样品中鸭源性成分的检测。

三、试剂盒组成(48T)
组成成分 数量 规格
鸭物种荧光qPCR反应液(Duck-qPCR MIX) 1管 720μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(Duck-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Bio-Rad系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品采集与DNA提取
6.1 样品采集
样品的采集按照国家标准《饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应(PCR)法》(GB/T 20190-2006)要求进行。
6.2 DNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Duck-qPCR MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Duck-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(Duck-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明鸭源性成分核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明鸭源性成分核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行鸭源性成分qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明鸭源性成分核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。