BIOTIN RNA LABELING MIX 10X

产品描述 General description 用于生物素-16-UTP标记RNA的便捷核苷酸混合物。 Specificity 热灭活：添加2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0)以终止反应。 Application 生物素RNA标记混合物已用于通过生物素-16-UTP与SP6、T7和T3 RNA聚合酶体外转录的RNA标记。[1][4] 生物素标记RNA还应用于一系列杂交技术： • DNA印迹 • RNA印迹[3] • 斑点印迹 • 菌落及菌斑清除 • RNA酶保护试验 • 原位杂交[2] • 微阵列杂交 • RNA pull down试验[1] Features and Benefits 组份 10x 浓缩液包含: ATP、CTP、GTP各10mM，6.5mM UTP，3.5mM生物素-16-UTP，pH 7.5 Quality 结合DIG RNA标记试剂盒进行了功能检测。 Principle 生物素标记的、确定长度的单链RNA探针通过体外转录产生。生物素-16-UTP通过SP6、T7和T3 RNA聚合酶以大约每20到25个核苷酸的间隔插入转录产物中，转录条件如下所述。生物素RNA标记混合物专为Roche SP6、T7和T3 RNA聚合酶设计，随附优化的转录缓冲液。 Preparation Note 反应时间：135分钟 样本材料 • 线性质粒DNA 待转录的DNA被克隆到适当的转录载体的聚链子位点，该转录载体与聚链子相邻，包含SP6、T7或T3 RNA聚合酶的启动子。为合成′终止′转录本，质粒被限制性内切酶线性化。应使用产生5&8242;-突出端的限制性内切酶；避免使用3&# 8242;突出端。线性化模板DNA应采用酚氯仿萃取和乙醇沉淀法纯化，以避免RNase污染。对于′循环′转录，应使用环状质粒DNA。 • PCR产物 含有RNA聚合酶启动子序列的PCR片段也可以作为转录模板。推荐在转录前通过凝胶电泳纯化正确的PCR片段。 标记效率 通过1μg线性模板DNA和RNA聚合酶进行标准标记反应，产生大约10μg全长生物素标记RNA。在斑点试验中，联用抗生物素-AP与化学发光底物CSPD可检测低至0.3pg的生物素标记RNA。 Other Notes 仅用于生命科学研究。不可用于诊断。