PCR DIG PROBE SYNTHESIS 1PC

产品描述 General description 试剂盒用于高灵敏度杂交探针的生成，并适用于检测低（单）拷贝的靶标序列。探针被标记上DIG-dUTP（碱不稳定的），通过聚合酶链反应方法。DIG-dUTP:dTTP的比例为1:2。 默克生命科学致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品为一种安全的化学品。 相对于核酸放射性标记和检测，DIG系统是一种灵敏、高成本效益替代方法。现有的许多出版物证明了DIG系统的多功能性，因此使用放射性标记不再是杂交DNA标记的唯一选择。 Application 用于聚合酶链反应（PCR）中DIG标记DNA探针的便捷高效生成。DIG标记的杂交探针是高度灵敏的，并适用于在Southern及Northern blot中用于稀少mRNA低（单）拷贝基因的检测。[2][3]DIG标记的DNA探针已用于在原位杂交中对DNA进行标记。[1] 该试剂盒含有Expand High Fidelity DNA聚合酶混合物。该稳健且带有校正活性的酶混合物将会使用10 pg质粒DNA以及10 ng基因组DNA作为模板进行40 bp至5 kb长探针的聚合。 所提供的dUTP-核苷酸混合物浓度可根据探针的长度进行调整。标记的有效性可通过琼脂糖凝胶进行快速的确定。 按照包装中附带的操作说明可对膜进行多次的剥离和重新结合。 一次PCR标记反应（50 μl）将通常会产生足够用于20 ml杂交溶液的探针。该试剂盒可用于约25次反应（50 μl）。DIG标记探针可稳定超过一年。 包装 1个试剂盒包含6种组分。 Quality 每个批次的PCR DIG探针合成试剂盒都在PCR中经过功能呢检测。扩增产品在基因组Southern blot中进行了检测。 在如本包装内插页所描述的PCR条件下，对照反应可生成442bp的扩增产物。由于在PCR过程中DIG-dUTP的多次插入，PCR产物的分子量将会相对于未标记PCR产物略有提高。在将PCR产物杂交至10μg人类基因组DNA后可通过后续的化学发光检测检测到特异性的片段模式。 Other Notes 样品材料 任何适合作为PCR模板的DNA都可被标记。可使用： • 质粒DNA, 10至100pg (最佳量 10pg) • 基因组DNA, 1至50ng (最佳量, 10ng) PCR中模板浓度是生成特异性探针的最为重要因素。对于绝大多数模板，请勿使用超过上述的给定量。过多的模板将会导致初级延伸产物的共扩增（那些复制超过了结合位点的）。这些初级延伸产品可能会含有重复序列或来自二级结合位点（如果从基因组DNA制备）或载体序列（如果从质粒DNA制备）的不相关产物。在后续的杂交检测中，探针-靶标的杂合物将会因为探针会与载体或基因组DNA序列交叉杂交而形成拖尾。 为了获得更好的结果，可使用克隆的插入片段作为模板。基因组DNA可能会更难以使用。 模板的纯化对于PCR标记并没有其他类型标记那么重要。 一次反应可生成用于分析650cm2印迹膜的足够标记探针。 仅用于生命科学研究。不可用于诊断。