DNA纯化回收试剂盒(磁珠法)

本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的核酸纯化方法。该产品可用于二代测序建库时DNA的选择性或非选择性回收，以及PCR产物的纯化回收。试剂盒中的MagPure与样品按一定比例混合后，磁珠选择性将核酸吸附。经两步漂洗后，洗脱得到的DNA纯度高，A₂₆₀/_A280的比值在1.7-1.9之间,A₂₆₀/A₂₃₀的比值通常在2.0以上。经该试剂盒纯化得到的DNA适用于PCR，Real-Time PCR，测序，southern blotting等实验。
 

样品类型	典型产率
5000 bp segment	Up to 90%
1000 bp segment	Up to 90%
500 bp segment	Up to 80%
200 bp segment	Up to 70%

试剂盒组成：

组分	5ml	50ml
MagPure	5ml	50ml

保存条件：2-8℃保存，室温运输。

自备仪器及试剂：
1．磁力架
2．80%乙醇。
3．洗脱液：Buffer EB (10mM Tris-HCl,pH8.0)；去离子水(pH在7.0-8.0之间)。

实验前准备及重要注意事项：
1．冰冻、离心、超声会对MagPure中的磁珠造成不可逆的损害。
2．MagPure中磁珠长期放置后会聚集成团，从而使磁珠表面积减小，降低样品回收得率，使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠。
3．使用前，建议将MagPure涡旋震荡混匀后分装到1.5ml的离心管中，每管分装1ml MagPure。
4．本试剂盒不适用于纯化回收小于100 bp的DNA片段，如果要回收小于100 bp的DNA片段，建议将MagPure的用量增加到样品体积的4倍。
5．进行DNA的选择性回收时，MagPure对于DNA溶液中的离子浓度较为敏感。不同厂家的二代测序建库试剂盒得到的接头连接后的DNA溶液以及PCR扩增产物中离子浓度不同，所以用MagPure做DNA选择性回收时，试剂用量有所不同。

操作步骤：
1．涡旋振荡MagPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2．向1.5ml的离心管中加入纯化的DNA溶液。
3．向上一步的离心管中加入2倍样品体积的MagPure，涡旋震荡5秒后室温静置5分钟。
4．将上一步的离心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附（约需5分钟）。
5．保持离心管固定于磁力架上，彻底弃去溶液，期间避免接触磁珠。
6．继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇。
7．保持离心管固定于磁力架上，待悬起的磁珠完全吸附后彻底弃去乙醇。
8．重复步骤6-7两次。
9．保持离心管固定于磁力架上静置放置10分钟，使乙醇完全挥发干净。
10.将离心管从磁力架上取下，加入20-100μl EB（自备）或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中后，室温放置5分钟。
11.将离心管放于磁力架上直至磁珠完全吸附（约需5分钟）。
12.将洗脱液转移至一个新的1.5ml离心管中。此时，可弃去磁珠。

纯化回收得率的计算：
我们建议通过琼脂糖电泳纯化前后的样品进行回收得率的计算。我们不建议通过260nm处的光吸收值来计算回收得率。因为溶液中单链、双链DNA和dNTP以及一些纯化前的某些杂质在260nm处都有光吸收，这样在计算回收前样品中DNA浓度时会得到一个假的、虚高的DNA浓度。