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线粒体提取试剂盒

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  • 上海一研
  • EY-19241
  • 进口、国产
  • 2025年11月27日
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      详见说明书

    • 供应商

      上海一研

    • 保存条件

      低温

    • 规格

      50T|100T

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    中文名称:线粒体提取试剂盒
    英文名称:

    产品规格:50T|100T
    发货周期:1~3天
    线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
    操作步骤:
    1. 样本处理:
    a. 组织匀浆:称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨组织20次;
    b. 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800g离心5~10 min收集细胞,计数。每次提取需要5×107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨30~40次。
    2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4℃,1000g 离心5 min。
    3. 取上清,转移至新的离心管中,4℃,1000g再次离心5 min。
    4. 取上清,转移至新的离心管中,4℃, 12,000 g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底。
    5. 往线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000 g 离心5 min。
    6. 取上清,转移至新的离心管中,4℃, 12,000 g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底。
    7. 用50 -100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。
    储存条件:-20℃

    产品细节图片1
    线粒体提取试剂盒使用注意事项
    1. 微量试剂取用前请离心集液。
    2. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide(PI)避光保存及使用。
    3. Propidium Iodide (PI)有毒,操作时请戴手套。
    4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
    5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
    6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
    7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
    使用说明 
        1. 细胞的增殖和细胞毒实验,一般可在96孔细胞培养板中进行。 
        2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞;细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定)。 
        3. 接种的细胞按照实验需要,送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物; 
        4.培养结束后,每孔加入20微升MTT溶液,在细胞培养箱内继续孵育3-6小时;   
        5.孵育结束后,每孔加入100微升Formanzan溶解液,在37℃细胞培养箱内再继续孵育,直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右,紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多,溶解的时间会略长。  
        6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片, 560-600nm范围的滤光片均可使用。
    叉头蛋白D1抗体英文全称Flavonoids glycosyl transferase英文简称UFGT检测范围3670nmol/L-2000pg/mL

    岩藻糖转移酶11抗体英文全称aminothiopropionic acid synase英文简称AAS检测范围3671nmol/L-120U/L
    干扰素诱导蛋白15抗体英文全称4-coumarate coenzyme A ligase英文简称4CL检测范围3672nmol/L-800mg/L
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    富含亮氨酸跨膜纤连蛋白1抗体英文全称Methane monooxygenase英文简称MMO检测范围3676nmol/L-160U/L
    富含亮氨酸跨膜纤连蛋白2抗体英文全称MCR英文简称MCR检测范围3677nmol/L-100U/L
    富含亮氨酸跨膜纤连蛋白3抗体英文全称glucan-water dikinase英文简称GWD检测范围3678nmol/L-10ng/ml
    FAM65B蛋白抗体英文全称6-deoxoCS英文简称6-deoxoCS检测范围3679nmol/L-10ng/mL
    胞外分泌型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶FAM20C抗体英文全称exoglucanase英文简称EG检测范围3680nmol/L-320mU/mL
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