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Adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein
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详见说明书
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上海一研
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低温
- 规格：
1ml|10×1ml
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中文名称：Ad-GFP-LC3B
英文名称：Adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein
产品规格：1ml|10×1ml
发货周期：1～3天
本品是一种可以表达GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染细胞或组织后进行细胞自噬(autophagy)的检测。
LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族，其中对于LC3B的研究最为广泛。到目前为止，LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶， 以ATG3为E2样连接酶，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙胺而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其极强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来。
自噬是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等不利的环境条件下， 细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。
Ad-GFP-LC3B是的重组腺病毒，感染后能够在靶细胞中有效表达绿色荧光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈现明亮的绿色荧光，可以用于细胞自噬的检测。
腺病毒感染细胞后为瞬时表达，通常不会与基因组DNA重组，不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后，有效表达时间通常不少于7天，不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表达很可能会大大减弱。
Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重组腺病毒载体系统，感染普通的细胞后不能进行扩增和重组，从而可以有效降低本产品在活体生物中的风险。
本产品可以在表达E1的HEK293A、HEK293等适当细胞中扩增。
本产品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用时可以按照108pfu/ml进行计算。如果按照20 MOI感染6孔板的细胞，每孔50万细胞计算，共可以感染10个孔；如果按照20 MOI感染24孔板的细胞，每孔10万细胞计算，共可以感染50个孔。如果MOI值提高，则相应可以感染的孔数会减少；如果MOI值降低，则相应可以感染的孔数会增加。
储存条件：-20℃，有效期1～2个月。
Ad-GFP-LC3B使用注意事项
1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5． 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。
3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物；
4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；
5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。
酸敏感离子通道蛋白3抗体英文全称Platelet-Derived Growth Factor Receptor英文简称PDGFR检测范围595nmol/L-8ng/mL
天门冬氨酸β羟化酶抗体英文全称Platelet-Derived Growth Factor-D英文简称PDGF-D检测范围596nmol/L-2000pg/mL
精氨酸加压素受体2抗体英文全称Nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase 3英文简称NMNAT3检测范围597nmol/L-120ng/mL
细胞骨架肌动蛋白样蛋白3抗体英文全称oxidized high density lipoprotein英文简称OxHDL检测范围598nmol/L-96mg/dL
3号染色体开放阅读框15抗体英文全称Trypsinogen-2英文简称Try-Ⅱ检测范围599nmol/L-240ng/mL
载脂蛋白B受体抗体英文全称Insulin-like growth factor 2 Receptor英文简称IGF-2R检测范围600nmol/L-100ng/mL
三磷酸腺苷结合盒转运蛋白2抗体英文全称Insulin-like growth factor 4英文简称IGF-4检测范围601nmol/L-160ng/mL
载脂蛋白B抗体英文全称Insulin-like growth factor I Receptor英文简称IGF-IR检测范围602nmol/L-160ng/mL
花生四烯酸15脂氧合酶2抗体英文全称Carboxypeptidase B2英文简称CPB2检测范围603nmol/L-16ng/mL
低密度脂蛋白受体衔接蛋白抗体英文全称PANDER英文简称PANDER检测范围604nmol/L-64ng/mL
载脂蛋白C4抗体英文全称Acetylcholinesterase antibody英文简称AChE-Ab检测范围605nmol/L-40IU/L
原始广泛存在蛋白1抗体英文全称hepatitis B virus X interacting protein英文简称HBXIP检测范围606nmol/L-40pg/mL
膜粘连蛋白8抗体英文全称HBxAb英文简称HBxAb检测范围607nmol/L-240IU/L
水通道蛋白8抗体英文全称HBV preS1Ab英文简称HBV preS1Ab检测范围608nmol/L-80IU/L
锚蛋白重复结构域蛋白40抗体英文全称HBV preS2Ab英文简称HBV preS2Ab检测范围609nmol/L-80IU/L
Ad-GFP-LC3BFructus momordicae罗汉果PCR鉴定试剂盒 中文名称 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白4抗体别 名 ABC 41; ABC41; ABCD 4; ABCD4; ABCD4_HUMAN; ATP binding cassette sub family D (ALD) member 4; ATP binding cassette sub family D member 4; ATP-binding cassette sub-family D member 4; P70R antibodyP79R; Peroxisomal membrane protein 1 like; Peroxisomal membrane protein 1-like; Peroxisomal membrane protein 69; PMP 69; PMP69; PMP70-related protein; XMP 1L; PXMP1 L; PXMP1-L; PXMP1L.研究领域 细胞生物 信号转导 转运蛋白 细胞膜蛋白蛋白分子量 predicted molecular weight: 69kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ABCD4
Caulis trachelospermi络石藤PCR鉴定试剂盒 中文名称 肌动蛋白结合蛋白LIM3抗体别 名 abLIM-3; Ablim3; ABLM3_HUMAN; Actin binding LIM protein 3; Actin binding LIM protein family member 3; Actin-binding LIM protein 3; Actin-binding LIM protein family member 3; HMFN1661; KIAA0843.研究领域 细胞生物 结合蛋白 细胞骨架蛋白分子量 predicted molecular weight: 78kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ABLIM3
Lasiosphaera seu calvatia马勃PCR鉴定试剂盒 中文名称 高尔基复合体相关蛋白1抗体别 名 ACBD 3; ACBD3; Acyl CoA binding domain containing protein 3; Acyl Coenzyme A binding domain containing 3; Acyl-CoA-binding domain-containing protein 3; GCP 60; GCP60; GCP60_HUMAN; GOCAP 1; GOCAP1; Golgi complex associated protein 1 60kDa; Golgi complex associated protein 1; Golgi complex-associated protein 1; Golgi phosphoprotein 1; Golgi resident protein GCP60; GOLPH 1; GOLPH1; PAP 7; PAP7; PBR and PKA associated protein 7; PBR associated protein; PBR- and PKA-associated protein 7; Peripheral benzodiazepine receptor associated protein PAP7; Peripheral benzodiazepine receptor-associated protein PAP7; Peripherial benzodiazepine receptor associated protein; PKA (RIalpha) associated protein.研究领域 细胞生物 信号转导 生长因子和激素 细胞周期蛋白蛋白分子量 predicted molecular weight: 60kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ACBD3/GOCAP1
Herba portulacae马齿苋PCR鉴定试剂盒 中文名称 乙酰辅酶A羧化酶1ACCα抗体别 名 ACAC; ACACA; ACACA; ACACA_HUMAN; ACC alpha; ACC-alpha; ACC1; ACC1; ACCA; Acetyl Coenzyme A; Biotin carboxylase; ACACA_MOUSE; Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha; ACACA_RAT.研究领域 肿瘤 细胞生物 信号转导 转录调节因子 激酶和磷酸酶 新陈代谢蛋白分子量 predicted molecular weight: 266kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ACACA
Fructus aristolochiae马兜铃PCR鉴定试剂盒 中文名称 去整合素样金属蛋白酶12别 名 A disintegrin and metalloproteinase domain 12; A disintegrin and metalloproteinase domain 12; ADA12_HUMAN; ADAM 12; ADAM metallopeptidase domain 12; ADAM12; Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 12; MCMP; MCMPMltna; MCMPMltna; Meltrin alpha; Meltrin-alpha; MLTN; MLTNA; OTTHUMP00000046766.研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 信号转导 细胞粘附分子 细胞骨架 细胞外基质 泛素蛋白分子量 predicted molecular weight: 77kDa性 状 Lyophilized or Liquid免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ADAM12/MLTN
DME培养基10升DMEM高糖，含酸钠和谷氨酰胺
10升高糖,含L-谷氨酰胺，粉末
500毫升高糖,含L-谷氨酰胺，液体
10升低糖，粉末
500毫升低糖，液体
M9肉汤250克M9 BrothBR
中文名称：Ad-GFP-LC3B
英文名称：Adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein
产品规格：1ml|10×1ml
发货周期：1～3天
本品是一种可以表达GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染细胞或组织后进行细胞自噬(autophagy)的检测。
LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族，其中对于LC3B的研究最为广泛。到目前为止，LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶， 以ATG3为E2样连接酶，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙胺而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其极强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来。
自噬是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等不利的环境条件下， 细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。
Ad-GFP-LC3B是的重组腺病毒，感染后能够在靶细胞中有效表达绿色荧光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈现明亮的绿色荧光，可以用于细胞自噬的检测。
腺病毒感染细胞后为瞬时表达，通常不会与基因组DNA重组，不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后，有效表达时间通常不少于7天，不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表达很可能会大大减弱。
Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重组腺病毒载体系统，感染普通的细胞后不能进行扩增和重组，从而可以有效降低本产品在活体生物中的风险。
本产品可以在表达E1的HEK293A、HEK293等适当细胞中扩增。
本产品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用时可以按照108pfu/ml进行计算。如果按照20 MOI感染6孔板的细胞，每孔50万细胞计算，共可以感染10个孔；如果按照20 MOI感染24孔板的细胞，每孔10万细胞计算，共可以感染50个孔。如果MOI值提高，则相应可以感染的孔数会减少；如果MOI值降低，则相应可以感染的孔数会增加。
储存条件：-20℃，有效期1～2个月。
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1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5． 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。
3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物；
4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；
5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。
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文献和实验相关实验
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