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江西江蓝纯生物试剂有限公司
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124
种属来源: 兔
组织来源: 正常牙组织
疾病特征: 正常原代细胞
细胞形态: 成纤维细胞样
生长特性: 贴壁生长
培 养 基: 我们推荐使用EliteCell原代间充质细胞培养体系
作为体外培养原代牙周膜干细胞细胞的培养基。
生长条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37 ℃,
传代方法: 1:2至1:6,每周2次。
冻存条件: 90% 完全培养基+10% DMSO,液氮储存
细胞鉴定: CD146或STRO-1免疫荧光染色为阳性,经鉴定细胞纯度高于90%。
QC检 测: 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
兔牙周膜干细胞
特点和简介
牙周病是口腔疾病中的常见病和多发病,常导致牙周支持组织破坏或缺损。目前,牙周支持组织重建主要依赖机械、药物或引导组织再生技术,随着分子生物学、组织工程学和干细胞技术的飞速发展,牙周组织再生工程技术成为牙周病治疗研究的热点,牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cell,PDLSC)是牙周组织再生工程的关键种子细胞之一。因此,关于牙周膜干细胞的研究逐渐成为热点。
接受后处理
1) 收到细胞后,请检查是否漏液 ,如果漏液,请拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5) 接到细胞次日,请检查细胞是 否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
培养操作
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,兔牙周膜干细胞置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
兔牙周膜干细胞
培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及 时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,责任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活 力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细 胞汇 合度 80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术 部 沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联 系,告知细胞的具体情况,以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
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文献和实验认为碱性磷酸酶在体外钙化中起着关键性作用,即若没有碱性磷酸酶活性,钙化就不会发生[ 6 ] 。其主要机制在于碱性磷酸酶能够水解有机磷酸酶使局部PO4 + 浓度升高,并可破坏钙化抑制剂,从而启动钙化。在细胞内碱性磷酸酶升高的同时,细胞分泌也相应增多,故通过定量测定细胞培养液中碱性磷酸酶的含量及细胞染色的阳性率可反映骨髓基质干细胞转化程度。 3 .2 成骨细胞 目前提取成骨细胞的主要来源是骨膜和松质骨,培养方法有酶消化法和组织贴块法。本实验中采用胎兔颅骨胶原酶消化法进行成骨细胞提取,消化剩余的骨组
miRNA 来调节受体细胞功能,是干预疾病进展和增强组织修复的有效策略。本研究旨在识别 sEVs 中的关键再生成分,揭示工程化 sEVs 有作为牙周炎个性化再生疗法的潜力。 研究成果及意义: 在本研究中,作者首先分离了 4 种干细胞(DFSCs/ADSCs/BMSCs/UCMSCs)的 sEVs,并检测了牙周膜细胞(PDLCs)摄取效率及成骨效应。结果发现 DFSC-sEVs 被 PDLCs 摄取最快,6 h 摄取率达 81.91%。功能实验证实,DFSC-sEVs 增强了 PDLCs 的 ALP
单位:空军军医大学国家口腔疾病临床医学研究中心 文章标题:Gold nanoparticles targeting the autophagy–lysosome system to combat the inflammation-compromised osteogenic potential of periodontal ligament stem cells: From mechanism to therapy 期刊:Biomaterials 影响因子:15.304 研究领域:牙周膜干细胞
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