中量全血基因组DNA提取试剂盒(3ml/次,溶液型)

中量全血基因组DNA提取试剂盒(3ml/次,溶液型)

● 5折促销！买一送一
● 操作步骤简单！
● 无需酚仿更安全！
● 基因组DNA完整性好！
● 典型的产量3ml全血可提取出50-150µg
● 一次处理20µl-10ml全血，试剂用量和全血等体积放大！

产品介绍：
本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA，首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA， 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过CH3CH0HCH3沉淀并重溶解于DNA溶解液，操作步骤简单，实验成本低，产量高，纯度好，适合各种下游实验。

产品特点：
1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。
2.不需要使用有毒的C6H60等试剂。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在60分钟内完成。
4.结果稳定，产量高（典型的产量3ml全血可提取出50-150µg），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

操作步骤：
本试剂盒为溶液型，可按照比例扩大或缩小每次处理的全血量（20µl-10ml）

1.吸取7-9ml 1x红细胞裂解液（需要先稀释到1x）到一个15ml离心管。使用前应该用去离子水将10x红细胞裂解液稀释10倍到1x。

2.将抗凝全血（使用前回复到室温）颠倒混匀后，吸取3ml全血加到上步装有红细胞裂解液的15ml离心管中，颠倒6-8次，并倒置轻弹管壁，确保充分混匀。

3.室温放置10分钟，期间颠倒混匀6-8次，也可放在漩涡震荡仪或摇床上震荡混匀帮助裂解红细胞。

4.2500 x g，4000rpm台式离心机离心2分钟，倒弃红色上清，在吸水纸上倒扣离心管吸净管口残留的血液。
可选步骤，再加入1-3ml红细胞裂解液上下颠倒几次，静置1-2分钟，2500 x g，4000rpm离心2分钟，之后倒弃红色上清，两次红细胞裂解DNA纯度更好。

5.加入3ml细胞核裂解液用巴氏吸管迅速有力的上下吹打10-15次帮助悬浮分散白细胞团（吹散白细胞团步骤非常重要，不可省略），然后在60-65℃水浴锅或烘箱中恒温放置30-45min左右，具体时间看白细胞裂解状况而定。
备注：剧烈涡旋震荡和迅速吹打可以帮助细胞核裂解液和白细胞接触并裂解，由于基因组DNA立刻释放出来，混合物会马上变得十分粘稠，就应停止吹打，以免剪切断基因组DNA。

6.可选步骤，一般不需要：在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至终浓度30μg/ml，颠倒25次混匀，37℃温育15分钟去除残留RNA，然后冷却回室温。

7.将离心管从水浴锅或烘箱中从取出，加入1 ml蛋白沉淀液后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25秒，混匀后见到一些小的蛋白团块。也可以用巴氏吸管迅速有力的上下吹打5-10次，这样混匀效果更好。

8.2500 x g，4000rpm离心5-10分钟。这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

9.小心吸取或者倒出上清（约4ml）到一个新的15ml离心管中。吸取上清时，注意不要吸到管底和漂浮在液体表面的蛋白沉淀，如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清。

10.加入等体积的室温异丙醇3-4ml，轻柔颠倒30次混匀或者直到出现棉絮状（丝状）白色DNA沉淀。

11.用黄枪头吸取DNA沉淀转移到洁净的1.5ml EP管中，并吸净上清液。加入300-500μl 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA沉淀，12,000rpm离心1分钟， 倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，也可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。注意不要干燥过头，否则DNA极其难溶，也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。

12.加入100-500μl DNA溶解液重新溶解DNA沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60分钟（不要超过一小时），期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。

13.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。