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小鼠膀胱基质成纤维细胞

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      上海机纯实业有限公司

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      小鼠膀胱基质成纤维细胞

    细胞名称:    小鼠膀胱基质成纤维细胞

    种属来源:    小鼠

    组织来源:    实验动物的正常膀胱组织

    疾病特征:    正常原代细胞

    细胞形态:    长梭形细胞,不规则细胞

    生长特性:    贴壁生长

    培 养 基:    我们推荐使用EliteCell原代成纤维细胞培养体系
     
    小鼠膀胱基质成纤维细胞


    作为体外培养原代膀胱基质成纤维细胞的培养基。

    生长条件:    气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37 ℃,

    传代方法:    1:2至1:6,每周2次。

    冻存条件:    90% 完全培养基+10% DMSO,液氮储存

    细胞鉴定:    波形蛋白(Vimentin)免疫荧光染色为阳性,经鉴定细胞纯度高于90%。

    QC检 测:    不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

    特点和简介
    膀胱是一个储尿器官。它是一个囊形结构,位于骨盆内,其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌,可以控制尿液的排出。膀胱基质成纤维细胞作为膀胱上皮细胞的支持细胞,起着十分重要的作用。体外培养膀胱基质成纤维细胞不仅为组织工程膀胱,尿道提供种植细胞的必要手段,也是研究膀胱纤维化的基础与前提。

    接受后处理
    1) 收到细胞后,请检查是否漏液 ,如果漏液,请拍照片发给我们。

    2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

    3) 弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基。

    4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

    5) 接到细胞次日,请检查 小鼠膀胱基质成纤维细胞是 否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

    培养操作
    1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。

    2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

    1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

    2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

    3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。

    4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

    3)细胞冻存:待细胞生长状态良时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;

    1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

    2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做标识。

    3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

    注意事项
    1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及 时和我们联系。

    2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,责任由客户自行承担。

    3.   用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活 力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。

    4.   静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。

    5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。

    6.   建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术 部 沟通交流。由于 小鼠膀胱基质成纤维细胞运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联 系,告知细胞的具体情况,以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。

    7.   该细胞仅供科研使用。
     

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