MDA-MB-231/ADR供应商

培养细胞冻存方案：
MDA-MB-231/ADR供应商以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低  1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

资源名称    MDA-MB-231/ADR供应商
种属  人乳腺癌细胞阿霉素耐药株
形态  上皮样
提供形式  P1-2代冻存管
安全等级  2
培养方法
培养基  90%高糖DMEM+10%FBS
传代方法  1:2~1:4传代；每周2~3次。
生长条件  95%空气+5%二氧化碳 37摄氏度
生长特性  贴壁生长
存储条件  50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮
详细说明
传代情况  C5
支原体检测  培养法（-）
STR  AmelogeninX；CSF1PO12，13；D13S31713；D16S53912；D18S5111，细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。

具体操作：
1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液：大鼠主动脉平滑肌细胞取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
运输和保存：
MDA-MB-231/ADR供应商视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

5505-63-5高端化学试Trihydrophobin 1蛋白(TH1)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
9007-73-2高端化学试纺锤体蛋白3(SPIN3)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
SOAT1英文名称：UCP-2高尔基体外周膜蛋白1抗体
5505-63-5高端化学试MRG结合蛋白(MRGBP)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
9007-73-2高端化学试Fritz蛋白(FRTZ)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
SIRT5英文名称：UCP-3高尔基体膜蛋白抗体
585-99-9高端化学试Paralemmin 2蛋白(PALM2)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
9007-73-2高端化学试古梅斯蛋白2(AMZ2)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
SLC2A4RG英文名称：UBXD2高尔基体磷蛋白6抗体
MDA-MB-231/ADR供应商phospho-beta Catenin (Tyr333)英文名称：Butyrylcholinesterase (NT)人胰岛样生长因子结合蛋白7(IGFBP7/MAC25/PSF)免疫试盒 英文名称/大鼠性成纤维生长因子(bFGF)ELISA Kit，48T/96T 20mg
Angiotensin II receptor(Ang II )英文名称：MMP-3(matrix metalloproteinase-3/Transin-1/SL-1/Stromelysin-1 precursor)白介12体
Taurine/BSA英文名称：E2F2电压门控性钾通道蛋白亚基kv6.1抗体
英文名称/兔子性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA Kit，48T/96T 200mg
Akt/PKC(Protein Kinase C,PKC)英文名称：MMP-7(Matrilysin/matrix metalloproteinases-7)白介4体
BSA/Cy5英文名称：E2F4电压门控性钾通道蛋白亚基KV6.3抗体 C21ORF62英文名称：Bcl-xL人微管相关蛋白1A/1B轻链3A(MAP1LC3A)免疫试剂盒
英文名称/豚鼠质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA Kit，48T/96T 150mg
Beta1-adrenergic receptor英文名称：MMP-14(Matrix metalloproteinase-14)胰岛样生长因子结合蛋白9体
phospho-CPLA2 (Ser505)英文名称：phospho-Bcl-xL (Ser62)人微管微丝交联因子1(MACF1)免疫试剂盒
注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。