胶原酶IV(进口原料）

胶原酶IV(进口原料）

产品介绍
本公司胶原酶来源于进口原料，酶活性高，纯度高。本品为固体粉末状态。
胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。
IV型胶原酶推荐用于胰腺组织和胰岛的分离。
外观为黑棕色粉末。
分子量68,000到125,000，
最适PH为6.3-8.8。
活性： 高于125 units/mg solid

 

酶的溶解性：0.05 - 0.1 mg/ml 胶原酶溶于50 mM TES buffer，pH 7.4 (37 ℃) 含 0.36 mM 氯化 钙。
反应体系的终浓度为50 mM TES，0.36 mM 氯化钙，25 mg 胶原，0.005-0.01 mg 胶原酶。

酶液在含有 0.3-0.5 mM 钙离子 PH  7.5 的条件下可以在 37 ℃维持活性 5 小时。在-20℃可以维持数月。

胶原酶能够特异性结合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸（X） 和甘氨酸之间的肽键。该粗品是溶组织梭菌分泌的混合酶。

主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白 酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶，组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共 同作用。

使用说明：
胶原酶的使 用浓度一般为0.1- 5 mg/ml，消化过程中可以搅拌以促进酶的消化。
胶原酶在消化的过程中可以引起 细胞的少量死亡，一般消化时间为15min至数小时。如果浓度发生变化那么消化时间可能更长。
消化过程中的缓冲液为含钙离子和BSA的Krebs Ringer Buffer。在消化的过程中如果细胞大量死亡 则需要降低酶量，同时可以加入0.5%BSA或5-10%血清来稳定细胞的状态和消化效果。
胶原酶的灭菌首先离心或者用0.8µm的滤器去掉不溶物。然后再用0.2µm的滤器过滤除菌。
盐酸 苯甲脒和TLCK联合作用可以与该酶成分中大部分的蛋白酶结合而抑制其活性，但是他们却不会抑 制胶原酶的活性。其中盐酸苯甲脒的浓度一般为1 mM，TLCK 的浓度一般为0.100-0.135 mM。值得 注意的是两者不能完全保证所有蛋白酶的活性均被抑制。
活性说明：
1 个胶原消化单位（CDU）：在 pH 7.4，37℃以及钙离子存在的条件下，以每5小时从胶原中 释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。 
1FALGPA 单位：在 pH 7.5、25℃以及钙离子存在的条件下，一个 FALGPA 水解单位每分钟 可水解 1.0μmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。 

激活剂：Ca2+，最适合浓度为5 mM。

抑制剂：EGTA、还原性谷胱甘肽、β-巯基乙醇、8-羟基啉、2,2'-联吡啶等。

底物：不同类型的胶原是其天然底物，而一些合成的多肽也可以作为其底物，比如： N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala (Km = 0.71 mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)- leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl- pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。除此之外N-Succinyl-gly-pro-leu-glypro7-amido-4-methylcoumarin是 类胶原酶的肽酶的底物。N-(2,4-Dinitrophenyl)-proleu-gly-leu-trp-ala-D-arg 氨基酸化合物是脊椎动物 胶原酶的底物。