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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 库存:
大量
- 英文名:
Collagenase, Type II, powder
- 运输方式:
冰袋运输,长时间储存于 2-8℃避光保存。有效期 2个月
- 规格:
100MG
产品介绍
本公司胶原酶来源于进口原料,酶活性高,纯度高。本品为固体粉末状态。
胶原酶Ⅱ适用于脂肪、肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织细胞的分离。
外观为黑棕色粉末。
分子量68,000到125,000,
最适PH为6.3-8.8。
活性: 高于125 units/mg solid
胶原酶能够特异性结合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸(X) 和甘氨酸之间的肽键。该粗品是溶组织梭菌分泌的混合酶。
主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白 酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶,组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共 同作用。
使用说明:
胶原酶II 可以用 TESCA buffer (50 mM TES,0.36 mM 氯化钙,pH 7.4,37°C)配制成 1-2 mg/ml。
也可以用含钙镁的 PBS、含钙镁的 hanks 或不含血清的培养基配制。(配完后分装,避免反复冻融)。
活性说明:
1 个胶原消化单位(CDU):在 pH 7.4,37℃以及钙离子存在的条件下,以每5小时从胶原中 释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。
1FALGPA 单位:在 pH 7.5、25℃以及钙离子存在的条件下,一个 FALGPA 水解单位每分钟 可水解 1.0μmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。
激活剂:Ca2+,最适合浓度为5 mM。
抑制剂:EGTA、还原性谷胱甘肽、β-巯基乙醇、8-羟基啉、2,2'-联吡啶等。
底物:不同类型的胶原是其天然底物,而一些合成的多肽也可以作为其底物,比如: N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala (Km = 0.71 mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)- leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl- pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。除此之外N-Succinyl-gly-pro-leu-glypro7-amido-4-methylcoumarin是 类胶原酶的肽酶的底物。N-(2,4-Dinitrophenyl)-proleu-gly-leu-trp-ala-D-arg 氨基酸化合物是脊椎动物 胶原酶的底物。
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文献和实验性。 罗氏胶原酶与Liberase系列产品的替换比较 小贴士: 1. Liberase系列产品根据胶原酶和中性蛋白酶的不同配比,分为不同消化活性的5种产品。您可以参考其他实验室的研究或已发表文献,进行合适产品的选择和操作流程参考。 2. 对于新的组织细胞的消化尝试,建议从Liberase TM开始您的实验,Liberase TM的消化活性范围对各种组织具有良好的通用性。 3. Liberase中Collagenase I + II 的纯度很高,与常规胶原酶消化实验
丁香园网友卡列宁的微笑的观点: 用Langendorff灌流消化(胶原酶II)只能取得心肌细胞。建议直接将心脏剪碎,成纤维细胞我们这里一般采用0.05%胰酶消化。无菌条件取出心脏D-hank's液(PBS也可)漂洗,剪碎心脏加入5倍体积消化液,37C水浴3-5min,反复吹打,静置,待自然沉降后弃去上清液。剩余沉淀再加入约5倍体积0.08%胰蛋白酶及0.1%胶原酶II混合液,反复吹打,大约10分钟(消化时间往往靠经验
以兔软骨细胞为例: ①一般根据实验要求,选取不同年龄组的兔子,实际上兔子的年龄越小越好,毕竟幼体组织的活力要高于成体组织的活力,耳静脉空气注射法处死后,无菌条件下分离后肢关节软骨和肋软骨,剥离包裹软骨组织的筋膜和软骨膜,放入盛有PBS液的培养皿中。 ②将分离得到的软骨组织剁碎成0.3-0.5mm的组织块,移入25cm2培养瓶,用含双抗的PBS液冲洗软骨3次。 ③加入软骨体积10-15倍的0.25%胰蛋白酶,37℃消化1-2小时后终止消化。 ④加入0.02%II型胶原酶
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