腰果源性成分核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

腰果源性成分核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

腰果源性成分核酸检测试剂盒（一管式 PCR-荧光探针法）
◆ 产品说明
物种鉴定系列中的过敏原鉴定试剂，可针对食品中过敏原成分的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于食品及其原料中过敏原腰果成分的检测，检出限为 0.01%。
◆ 产品组成（96 测试）
试剂 含量
A-腰果源-P 20μL × 8 管× 12 排
NG-P 100μL × 3 支
PG-腰果源-P 100μL × 2 支
◆ 适用仪器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。
◆ 自备耗材和仪器
①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属浴。
◆ 注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：样本制备区。
2）第二区：模板添加区。
3）第三区：扩增及产物分析区。
★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
◆样品处理
参照《SN/T 1961.4-2013 出口食品过敏原成分检测 第 4 部分：实时荧光 PCR 方法检测腰果成分》或其他标准处理样品，制备的样本保存待用。
样品的采集和制备是过敏原成分鉴别的重要步骤，防止交叉污染的措施按照 GB/T 27403 中的规定执行。详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
1.模板制备（样本制备区）
建议使用配套动物基因组 DNA 提取试剂盒，具体过程详见产品说明书。
2.添加模板（模板添加区，放置于冰盒上进行）
剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管，放置在室温待解冻后，离心 30 秒后揭开封口膜，向每管反应液中分别加入 5μL 模板，顺序为 NG、待测样品模板、PG-腰果源-P。盖好配套的 PCR 管盖后，涡旋混匀 30s，离心请于-20℃条件下保存，有效期 12 个月1min，立即进行 PCR 扩增反应。
3.扩增反应（扩增及产物分析区）
使用荧光定量 PCR 仪，荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 TAMRA。
按下列条件设置扩增反应：
PCR 循环 荧光收集位点
50℃ 2 分钟 1 个循环 —
95℃ 10 分钟 1 个循环 —
95℃ 15 秒
45 个循环
—
58℃ 1 分钟 ※
4.基线和阈值设定
基线调整取 3-15 个循环的荧光信号，阈值线应超过阴性对照扩增曲线的最高点。
◆ 结果判定
检测样品 Ct 值≤35，则判定为被检样品阳性，检出过敏原腰果成分。
检测样品 Ct 值≥40，则判定为被检样品阴性，未检出过敏原腰果成分。
检测样品 35＜Ct 值＜40，则重复一次。如再次扩增后 Ct 值仍为＜40.0，则判定为被检样品阳性，检出过敏原腰果成分。如再次扩增后 Ct 值≥40，则判定为被检样品阴性，未检出过敏原腰果成分。
★ NG 反应为平滑直线，PG 反应为“S”型扩增曲线，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。