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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Stbl2 competent cells
- 保质期:
-80℃(6个月)
- 供应商:
上海沪震实业有限公司
- 保存条件:
-80℃(6个月)
- 规格:
100ul*10/100ul*20
Stbl2 competent cells
| 编码 | 品名 | 规格 | 单位 |
| 沪震生物HZ811-100s | Stbl2感受态细胞 | 100ul*10 | 包 |
| 沪震生物HZ811-100 | Stbl2感受态细胞 | 100ul*20 | 包 |
Stbl2感受态细胞
保存条件:-80℃
Stbl2感受态细胞基因型
F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 Δ(lac-proAB) mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) λ-
Stbl2感受态细胞产品说明
Stbl2菌株来源于 JM109 E. coli strain,适合克隆不稳定插入片段(例如:正向重复序列,逆转录病毒序列等); mcrA 突变和mcrBC-hsdRMS-mrr deletion 使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列;同时Stbl2也可用于慢病毒载体的构建。recA1 和 endA1 的突变有利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。Stbl2感受态细胞经特殊工艺制作,经pUC19检测转化效率可达109 cfu/μg DNA。
Stbl2感受态细胞,Stbl2感受态细胞操作方法
1. Stbl2感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
Stbl2感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
一、材料与试剂 1. SOBor2xYT2. MES3. 足够80个管子的TFB(50 mL)/400转化DMSO4. 5 M NaCl 二、仪器 1. 离心机 三、步骤 1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。2. 加过夜培养的菌到500 ml 的SOB或2×YT,其装在4L瓶中以最大限度的透气。加入36 ml 5 M 的NaCl,在30℃下培养。3. 大约3 h,OD600达到0.5。4. 离心细胞。取沉淀,吸取
野生型 E.coli 并不容易转化,这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源 DNA 。经过多年的努力,科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源 DNA 的效率。那就是用化学方法处理细胞,使其改变膜对 DNA 的通透性。这种细胞就称为感受态细胞,即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术,它对于我们利用体外 DNA 重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型:一种是自然转化( natural transformation
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