- ¥680 - 2680
- 沪震生物/HZbscience
- HZ1001L
- 进口/国产
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
DH5α Chemically Competent Cell
- 保质期：
-80℃（6个月）
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 保存条件：
-80℃（6个月）
- 规格：
盒
DH5α Chemically Competent Cell 产品说明书
● 产品规格
DH5α Competent Cell 100μl /支
pUC19 (control vector, 10pg/μl) 10μl
保存条件（保质期）： -80℃（6 个月）
● 基因型
F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA
● 产品说明
DH5α 菌株是实验室最常用的感受态细胞。 缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入 DNA 的稳定性；lacZΔM15 的存在使DH5α 可用于蓝、白斑筛选。DH5α 感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率>5×108cfu/μg DNA。
● 操作方法
1. DH5α 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置 25 分钟。
2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入 700 μl 不含抗生素的无菌培养基 (2YT 或 LB)，混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分钟。
4. 5000 rpm 离心 1 分钟收集菌体，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或LB 培养基上。
5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15 h。
● 注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入目的 DNA 时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验7 的缓冲液来洗脱；洗脱液提前预热至 65℃ 也可以提高洗脱效率。 3. 提取质粒转化大肠杆菌效率低 大肠杆菌转化效率受到多种因素的影响，例如感受态细胞状态，转化方式及操作（电转或热激），质粒用量，质粒质量等等。从感受态角度优化，可以考虑感受态本身的状态，比如贮存时间、贮存方式不当会导致感受态转化效率明显降低，此外热激条件也会影响感受态转化效率，建议热激时间严格按照感受态类型或说明书操作。从质粒角度优化，可以进一步确认质粒用量，质粒浓度，质粒是否降解等。 4. 提取质粒转染细胞效率低
法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨
步骤 ] • 取 50 μL 大肠杆菌感受态细胞，加入适量质粒（体积不得超过 4 μL ）冰浴 30 min 后， 42℃ 热激 90 s ，马上放回冰上，冰浴 2 min ；加 400 μL LB 培养基，于 37℃ 摇床慢摇振荡培养 45-60 min ；取 50-100 μL 涂在含有氨苄青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固体培养基上， 37℃ 倒置培养过夜。
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