脾脏单细胞悬液的制备方法 脾脏研磨的方法: 1. 无菌条件下摘取脾脏,撕去脾脏被膜,用眼科剪将脾脏剪成小块。 2. 将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上,加入少量全血及组织稀释液(保证脾脏及获得的细胞处于液体环境中)。 3. 将脾脏放置于筛网上,使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨脾脏(尽量控制研磨力度,保持筛网悬空,避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡) 4. 研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网,收集细胞悬液,再经滤网过滤。 注: A. 可用酶消化法,使用胶原酶对脾脏组织进行消化,得到单细胞悬液。 B. 如果最终得到的细胞需要培养,那全过程所需试剂与器材均要求无菌。 C. 根据脾脏的体积控制单细胞悬液的浓度在108~109个/mL。 注意事项: A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。 B. 分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。 C. 待分离的组织要求新鲜,避免冷冻和冷藏。 D. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。 如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在制备单细胞悬液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。
参考文献:
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