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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
HIV-1 gag Gene Lentiviral ORF cDNA expression plasmid, C-GFPSpark tag
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:HIV-gag
反应种属:HIV
应用说明:
cDNA描述:Full length Clone DNA of HIV-1 (group M, subtype A, strain 92UG037.1) gag.
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文献和实验载体的构建 1. 构建原理 慢病毒属于逆转录病毒科,但其基因组结构复杂,除 gag、pol 和 env 这 3 个和单纯逆转录病毒相似的结构基因外,还包括 4 个辅助基因,vif、vpr、nef、vpu 和 2 个调节基因 tat 和 rev 。 HIV 21 是慢病毒中最具特征性的病毒,第一个慢病毒载体系统即以此病毒为基础进行构建的。慢病毒载体的构建原理就是将 HIV 21 基因组中的顺式作用元件 ( 如包装信号、长末端重复序列 ) 和编码反式作用蛋白的序列进行分离。载体系统包括包装
,而非作为基因转移载体。该慢病毒载体包含了完整的病毒基因组,仅仅是在env 基因框内插入了一个报告基因,由于存在病毒滴度较低,以及产生有复制能力的反转录病毒(RCR) 的巨大风险,这种载体从未被考虑用于基因治疗。但是,这种载体可以应用于病毒的生物学研究。2.2 第一代HIV-1 来源的慢病毒载体以Naldini以及Kafri构建的三质粒系统为代表。该载体系统由包装质粒、包膜质粒及载体质粒3 种质粒组成。载体质粒携带了5′端LTR 和全部5′端非翻译区域(包括gag 编码序列的350 个核苷
,用异源启动子序列代替,这样原始的HIV基因组中的9个慢病毒载体中只保留了3个(gag、pol和rev)。因此第三代慢病毒载体系统更加安全。 目前慢病毒已被广泛地应用在RNA干扰研究中。由于有些类型的细胞脂质体转染的效果差,转移到细胞内的shRNA半衰期短,体外合成的siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因此其应用也受到了较大的限制。采用事先体外构建能表达shRNA的载体,然后包装成能表达shRNA的慢病毒颗粒,就能直接感染一些难对付的细胞,不仅方便易行,且可以达到基因表达的持久抑制效果
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