- ￥2550
- Sino Biological
- 北京
- RG87565-ACGLN
- 2025年08月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃ to -80℃
- 保质期：
3个月
- 英文名：
Rat KRTHA3B Gene Lentiviral ORF cDNA expression plasmid, C-GFPSpark tag
- 库存：
99
- 供应商：
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格：
1 Unit
基因靶点：KRT33B
反应种属：Rat
应用说明：
cDNA描述：Full length Clone DNA of Rattus norvegicus keratin 33B
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文献和实验潜在的毒害作用,比如:vpr 可引起细胞周期停滞,vif能抑制某些细胞的生长而Nef 能引起凋亡。1997年,Zufferey 等将包装质粒上的 vif 、vpr 、vpu 和nef 基因敲除,从而得到第二代慢病毒载体,而其他方面与上述第一代载体系统一致。研究发现即使全部4 个调节基因都被敲除。病毒颗粒的产量也不会受到影响。这种载体仍然具有体外感染非分裂期细胞、在体感染分化成熟大鼠神经元的能力,但是目前尚不能确定这种载体是否能转染全部种类细胞。由于敲除的调节基因与野生型HIV-1 病毒的生活
，加入1ml含血清的生长培养基，再加入DNA-脂质体复合物。 6、将1ml重悬的293T细胞（1×106个细胞/ml）加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育过夜。 7、移除含有DNA-脂质体复合物的培养基移除，代之以DMEM（含丙酮酸钠和非必须氨基酸）。 8、转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min，去除沉淀。 9、病毒上清-80°C贮存。 包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。 注意
以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293FT细胞。 1、取1.5 ml灭菌EP管，加入1.5 μg包装混合质粒和0.5 μg表达质粒以及250μl的无血清Opti MEM。轻柔混匀，室温孵育5 min。 2、取1.5 ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250 μl无血清Opti-MEM I培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。 3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20 min。 4、用胰酶消化并记数293
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