Sino Biological 大鼠HNRNPA1基因ORF cDNA克隆 全长克隆载体

DNA的克隆

mRNA逆转录合成的双链cDNA分子。由于基因组DNA较大，不利于克隆，因此有必要将其处理成适合克隆的DNA小片段，常用的方法有机械切割和核酸限制性内切酶消化。若是基因序列已知而且比较小就可用人工化学直接合成。如果基因的两端部分序列已知，根据已知序列设计引物，从基因组DNA 或cDNA中通过PCR技术可以获得目的基因。二 载体的选择基因工程的载体应具有一些基本的性质：1）在宿主细胞中有独立的复制和表达的能力，这样才能使外源重组的DNA片段得以扩增。2）分子量尽可能小，以利于在宿主细胞中有较多的拷贝

基因分离克隆的方法

模cDNA文库测序的序列中确定新基因：首先确定获得的cDNA是否为基因全长cDNA，确定是否有典型的ORF及3’端及5’端。而后可以通过网上搜索确定是否为新的基因，同源比对在判断是否为新基因，若通过检验则为新的基因。10 基因分离克隆的新技术除上述几种基本的方法外，随着生物技术的发展和传统技术的改良，基因可隆的方法又有许多新的技术出现。如基因表达序类标记分析（SAGE）；由DDRT-PCR演变而来的代表性差异分析（RDA），包括基因组DNA（gDNA）的RDA和cDNA的RDA；抑制型差减杂交（SSH

基因克隆将基因组信息翻译成某种蛋白质组学信息

基因克隆将基因组信息翻译成某种蛋白质组学信息       将基因 组信息翻译成某种蛋白质组学有用信息的第一个界面是在表达的克隆阶段。通过普通数据库可以获得大量的有关基因组的信息。挖掘这些信息可以用来预测开放阅读框(open reading frame，ORF)，这些ORF可以根据序列的相似性预测功能而后归类。但是为了验证这些假定蛋白，必须先完成一项困难的任务，即获得一个预测ORF的真实克隆，并将其转化为容易表达的形式。对于原核生物而言，设计从预测的ORF扩增引物和直接