义翘神州 大鼠NAT9 cDNA克隆 哺乳动物表达 nat基因

基因差异表达技术

screening），适用于分离经特殊处理而被诱发表达的mRNA的cDNA克隆。为了增加这种方法的有效性，后来又发展出了扣除杂交（subtractive hybridization）或扣除cDNA克隆（subtractive cDNA cloning），它是通过构建扣除文库（subtractive library）得以实现的。（一）差别杂交 从本质上讲，差别杂交也是属于核酸杂交的范畴。它特别适用于分离在特定组织中表达的基因、在细胞周期特定阶段表达的基因、受生长因子调节的基因、以及在特定发育阶段表达的或是参与发育

基因克隆的流程

研究某个 gene 的功能通常要做相关的功能实验，常用的手段有 gain-of-function，涉及 gene 的过表达，在下文中即将讲述；还有 loss-of-function， 通常涉及 gene 的 knock-out 或 konck-down，暂且不提。今天准备跟大家分享一下如何成功地用传统酶切酶连的方法克隆某 gene 的经验，虽然现在同源重组的方法已经越来越广泛地应用到科研中，属于 technology based innovation，给实验带来极大便利。但是传统的克隆

RT-PCR 在基因表达检测中的应用

适的酶切并与适于表达的载体连接或制备成探针。 按此方法可在一星期内完成从 RNA 样品到用于高效表达的修饰 cDNA 克隆。这比常规的合成/筛选 cDNA 库，亚克隆靶 cDNA，为达到表达目的而对克隆进行诱变等过程要简单得多。 区别主要在于用于扩增和分离 cDNA 克隆的引物为简并引物。引物序列是根据氨基酸的序列而定的，因此当只知道很少的蛋白质序列时，就有可能扩增特异的 RNA 分子。 当只知一个内部序列时，只用一个基因特异性寡核苷酸引物，也可用 PCR 从稀有mRNA 中分离出