SMM CHO-GSI Expression Medium (Serum free, without L-Glutamine)
产品描述
SMM CHO-GSI 培养基主要是为提高CHO稳定株的蛋白产量而开发的，无血清，无动物源成分的培养基。不含L-谷氨酰胺，使用时需加入4mM的L-谷氨酰胺。不含HT。推荐用于CHO GS表达系统。
产品特点
蛋白表达量高，细胞生长好，严格的质控，批次稳定性好。
产品用途
仅用于科学研究，不推荐用于人类或动物的诊断和治疗。
储存条件
2-8℃避光储存12个月。
产品使用效果
SMM CHO-GSI 培养基和SMS CHO-GS-SUPI 加料液联合使用的情况下，CHO GS表达系统效果图。
培养方法
（一）细胞复苏
1.取出冻存管，迅速在37℃水浴锅里融化，整个过程最好控制在1分钟以内。
2. 轻轻地混匀细胞并全部移到50ml的离心管中，逐滴加入 5-8ml在37℃水浴锅里预热的新鲜培养基。100g，5min离心细胞。
3. 倒掉上清，用10-20mL在37℃水浴锅里预热好的新鲜培养基重悬细胞，放到100mL培养瓶中。然后将细胞放到37℃，5%的CO2恒温摇床中，110-175rpm培养。
4. 2-5天后取样计数细胞密度和活率，如果细胞密度达到1.0X106cells/ml，则24进行正常传代培养；如果细胞密度低于1.0X106cells/m，则收集细胞进行离心处理，100g，5min。然后重悬到20-30ml已经在37℃水浴锅里孵育好的新鲜培养基，继续培养。
5. 细胞生长正常后，传代时起始密度控制在0.3X106cells/ml ，3-4天传一次代。
注意事项：冻存管融化速度越快越好；由于刚复苏的细胞比较脆弱，所以整个过程要轻以免损伤细胞。
（二）细胞传代
1. 取样计数细胞，计算细胞密度。
2. 按照起始细胞密度0.3-0.4X106cells/ml，计算所需细胞悬液和培养基的用量传代，100ml的培养瓶中放15-20ml培养（或250ml的培养瓶放50-60ml培养）。37℃恒温培养箱中培养，5%CO2，摇床转速：110-175rpm。
3. 每3-4天传一次代，起始细胞密度传到0.2-0.3X106cells/ml。
如何使 CHO稳定株细胞适应SMM CHO-SI培养基：
通常情况下，细胞不经过驯化而能直接适应SMM CHO-GSI培养基，下面我们推荐2种方式来更换培养基：1）直接更换；2）逐步更换。首先选用的细胞要在对数生长期，同时细胞活率大于90%。
（三）直接更换
1. 细胞培养在加5-10%血清传统的培养基或其他无血清培养基里，直接稀释传代到SMM CHO-GSI培养基，细胞密度控制在0.3-0.4X106cells/ml。
2.然后放入5%CO2、37℃的恒温培养箱中，110-175rpm转速条件下培养。
3. 3-5天后进行传代或者换液
4. 继续传代培养，起始细胞密度控制在0.3-0.4X106cells/ml，直到完全适应SMM CHO-GSI培养基。
5. 经过几代在100%的 SMM CHO-GSI培养基中培养，传代后4-6天细胞的密度可以达到2-3X106cells/ml，细胞活率大于90%。这时说明细胞已经完全适应SMM CHO-GSI培养基。 注意: 如果直接更换没有成功，则进行逐步更换的方法养基。
注意: 如果直接更换没有成功，则进行逐步更换的方法
（四）逐步更换
1.细胞培养在加5-10%血清传统的培养基或其他无血清培养基里，稀释传代，细胞密度控制在0.3-0.4X106cells/ml，原培养基与SMM CHO-GSI培养基的比例为75:25。
2.然后放入5%CO2、37℃的恒温培养箱中，110-175rpm。
3. 3-5天后进行传代，如果细胞生长正常，则传代时原培养基与SMM CHO-GSI培养基的比例为50:50. 细胞密度仍控制在0.3-0.4X106cells/ml。
4. 重复步骤3逐步增加SMM CHO-GSI培养基的比例（原培养基与SMM CHO-GSI培养基的比例为25:75；10:90）直到100%的SMM CHO-GSI培养基。
5.在100%的SMM CHO-GSI培养基中，传代后4-6天细胞的密度可以达到2-3X106cells/ml，细胞活率大于90%。这时说明细胞已经完全适应SMM CHO-GSI培养基。
（五）冻存细胞
冻存细胞时CHO cells 要处在对数生长期同时细胞活率在90%以上。
1.取样计数细胞，根据冻存管数计算所用细胞悬液体积和冻存液的体积，比例如下：92.5%的培养基混合物（50% 的新鲜SMM CHO-GSI培养基+50% 条件SMM CHO-GSI培养基 ）+ 7.5% DMSO，最终的细胞数为 5 x 106cells/ 管。
2.准备相应体积的冻存培养基：46.25% 的新鲜SMM CHO-GSI培养基 + 7.5% DMSO，放在4°C 备用。冻存培养基最好为当天配制。
3.通过100g，5-10min离心收集细胞，留46.25%条件培养基重悬细胞，然后逐滴加入事先准备好的放4°C 的冻存培养基。
4.混合均匀后分装细胞到冻存管中，一般2ml的冻存管放1-1.5ml，贴好标签。
5.然后放到冻存盒中，放入-80°C 冰箱(每分钟下降1°C)。
6.80℃冰箱中过夜放置（至少放置24小时），转移细胞到液氮罐中，推荐储存条件在-125°C to -200°C。
文献和实验
技术资料
