- ￥480 - 915
- GBI
- 苏州
- GB2001
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
一年
- 英文名：
Seamless Cloning
- 库存：
大量
- 供应商：
苏州神洲基因有限公司
- 保存条件：
-20C
- 规格：
12/24个反应/12反应/24反应
| 规格： | 12/24个反应 | 产品价格： | ￥480 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 12反应 | 产品价格： | ￥480 |
| 规格： | 24反应 | 产品价格： | ￥915 |
GBclonart 无缝克隆 ( Seamless Cloning ) 是一种新的、快速、简洁的克隆方法。传统的PCR产物克隆方法主要有两种：一种是PCR引物设计时引入载体上的酶切位点，PCR产经双酶切后定向克隆到目的载体上；另一种是TA载体连接。这两种方法费时费力，过程繁冗。GBclonart无缝克隆和组装技术旨在克服上述缺陷，它可以在质粒的任何位点进行一个或多个目标DNA的片段的插入，而不需要任何限制性内切酶和连接酶。它可以为您解决克隆方面的技术困扰，提高您的工作效率，让您的工作变得轻松高效。
特点：
1.灵活的位点选择：可以在载体的任意位置进行基因克隆
2.快速简便：30分钟完成载体构建
3.精确：不需要增加任何额外的程序
4.克隆效率高：高达90%阳性克隆
适用范围：
1. 载体DNA片段克隆
2. 载体DNA转移
3. 高通量克隆
GBclonart 流程图：
GBclonart操作流程 ：
| A. 载体制备--线性化处理 | ||||||||||
| 1. 酶切法 选取合适的位点，单酶切或双酶切皆可，但是单酶切容易 导致载体自连，载体线性化不彻底容易导致假阳性的产生。为了降低自连背景，提高阳性率，建议采用双酶切，而且对酶切后的载体进行割胶纯化。 |
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| 2. PCR法 选取合适的位点，设计正向和反向引物，建议采用高保真的DNA聚合酶扩增。为了避免模板质粒DNA对后续试验的影响，建议对PCR扩增后的线性化载体进行割胶纯化，去除环状模板质粒，提高阳性率。 |
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B. 目的插入片段制备 设计引物进行目的片段的PCR扩增，引物设计要保证目的片段两端有至少15bp序列与线性化载体的两端一致便于重组反应的进行。PCR每条引物长度至少在35-40bp,包括5’端与载体同源的15bp以及目的片段特异性序列20-25bp。 （注意：如果是表达载体克隆构建,设计引物时,应注意检查读码框的正确性。引物的质量对克隆成功率有很大影响，请使用HPLC或PAGE纯化的引物。尽可能选用Pfu等高保真酶，同时建议对PCR产物进行割胶纯化。） |
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C. 重组反应 |
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| 1: 将目的DNA片段和线性化载体以适当摩尔比加到试管中进行反应，载体的用量为50-100ng。 （注意： 目的片段与载体的摩尔比在2:1-3:1之间最佳，否则会降低载体与目的片段的重组效率，反应时间30分钟，时间过长或过短均不利于重组反应。） 反应体系如下： |
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2. 混匀后在45 ℃水浴锅或PCR仪中放置30min，然后转移到冰上。 |
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| 3. 立即进行感受态细胞转化实验，剩余反应液可保存在-20 ℃待用 |
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D. 转化 1. 从-80℃取出一支含有100μl的感受态细胞的管子，冰上溶化。 将5μl反应液加入至100μl感受态细胞中，冰上继续放置5分钟。 2. 42℃水浴1分钟， 然后返回冰上放置2分钟。 3. 加入400μl不含抗生素的LB或SOC， 37℃震荡培养60分钟左右。 4. 将上述200μl感受态细胞均匀铺在含有抗生素的LB盘子上， 37℃温箱过夜。第二天，挑3--5个克隆进行检验。 |
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引物设计：
如果线性化载体由酶切产生，根据酶点位置的不同设计引物，以下为三种常见引物设计方法：
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文献和实验市面上的 ELISA 试剂盒五花八门，质量良莠不齐。如何浪里淘金，选择既符合科研需求，又品质上乘的 ELISA 试剂盒呢? 教你七招，快速搞定 ELISA 试剂盒的选择！ 01 查找待测样本的蛋白浓度 通过检索 SCI 文献、Genecards、Mayocliniclabs 等，获得目标蛋白的表达部位及表达浓度参考值，比较 ELISA 试剂盒中给出的样本测值与参考值是否一致。 02 明确试剂盒的应用种属＆检测的样本类型 不同厂家验证的样本类型不同。除试剂盒特别说明外，一般情况下，不同
本文主要介绍 ELISA 试剂盒、实验样本、相关问题，帮助大家更好地开展实验 试剂盒 Q1：科研试剂盒与临床试剂盒的区别 ？ A1：临床试剂是经过权威机构认可的，如 FDA、CFDA 等；而科研试剂一般是厂家自主研制，不需要通过权威机构验证。 经营临床诊断类产品的机构需要取得《医疗器械经营企业许可证》；经营科研试剂的机构不需要此证件。 临床试剂盒一般仅用于检测人血清/血浆等较为单一的分泌性样本类型；科研试剂盒的样本检测种类、检测范围则比临床试剂盒宽广得多。但一般来说，临床试剂盒的质量
针对同一指标，生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗？
一、两种方法检测原理 两种方法的基本原理都是朗伯-比尔定律，但是具体形成过程和检测的方法不一样的。 1) 生化试剂盒检测原理 生化试剂盒检测的本质就是某物质化学变化的显色反应，其反应过程可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标作图，如下所示： 延迟区：无规律可寻。 等速区：对应的是速率法，一般应用于酶活力的检测。 过渡区：对应的是固定时间法，目的是解决某些化学反应的非特异性问题，提高准确度。 平衡区：对应的是终点法，主要是测定某物质在样本中的含量。 目前
