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文献和实验Invader Assay for SNP Genotyping
of its target-specific region. The cleaved 5′ flap serves as a signal for the presence, and enables quantitative analysis, of the specific target in the sample. Fig. 1. Invader assay for analysis of the (A) C677 and (B) T677 polymorphisms
的。 11、引物应具有特异性 引物设计完成以后,应对其进行 BLAST 检测。如果与其它基因不具有互补性,就可以进行下一步的实验了。值得一提的是,各种模板的引物设计难度不一。有的模板本身条件比较困难,例如 GC 含量偏高或偏低,导致找不到各种指标都十分合适的引物;用作克隆目的的 PCR,因为产物序列相对固定,引物设计的选择自由度较低。在这种情况只能退而求其次,尽量去满足条件。做 Real Time 时,用于 SYBR Green I 法时的一对引物与一般 PCR 的引物,在引物设计上所要求的参数是不同
3`-T突出端的载体用于直接高效地连接PCR产物。系统中也包含感受态细胞和S.O.C培养基, 使得实验操作更为简单方便。所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物,不需将PCR产物进行优化,不需把PCR产物做平端处理(Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆)。不需在PCR扩增产物上加接头,即可直接进行克隆。图32 The TA Cloning® ConceptTopo TA克隆方法(Topo TA Cloning Kit)Topo TA克隆原理与TA克隆一样,唯一不同的是TA克隆用的是T
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