钾离子载体II

四步致胜奇招 高效克隆你值得拥有（上篇）

”自我连接、目标片段正向/反向插入傻傻分不清，徒增后面的筛选烦恼。做实验，有时真需要一点运气。 好运气不常有，合适的酶切位点跟合适的爱情一样不那么容易碰到。载体和片段的酶切位点难得一致——有时你有我无，有时前后顺序相反，有时两边全都对不上。但是“拼接”双方的任务是必须完成滴，运气不够就要靠技术和经验：有没有同裂酶？有没有能产生同样粘端可互补的酶——举例说 BamH I(G/GATCC)、Bcl I(T/GATCA)、Bgl II(A/GATCT)、Dpn II(/GATC)、BstYI(R

miRNA的靶基因的寻找与鉴定

类似物的瞬时表达方式。miRNA的过表达载体中有插入成熟miRNA、pre-miRNA及pri-miRNA序列三种形式。其中pri-miRNA（含侧翼序列）的方式由于保留了每个microRNA独自的原始天然双臂结构，效果更好，是应用最为广泛的方法。microRNA过表达系统中有CMV启动子（II型启动子）和H1启动子（III型启动子）两种方式供选择。III型启动子（H1、U6等）具有表达效率高、有效的确定终止位置等优点，成为首选。II型启动子适用于pri-miRNA序列中有连续的5个T-导致III

常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)

常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等） 在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。 无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T载就不必考虑了）。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5' 端。常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI