钙离子载体II

佛波酯和钙离子载体诱导的CTL颗粒酶释放分析法

佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体诱导的CTL颗粒酶释放分析法   【基本原理】    用佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体处理CTL，通过一种TCR复合物非依赖性机制，刺激CTL细胞颗粒酶的胞泌作用。   【试剂及材料】 （1）         1mg/ml十四酰佛波乙酸酯（phorbol myristate acetate，PMA）二甲亚砜溶液。 （2）         1mg/ml钙离子载体

四步致胜奇招 高效克隆你值得拥有（上篇）

”自我连接、目标片段正向/反向插入傻傻分不清，徒增后面的筛选烦恼。做实验，有时真需要一点运气。 好运气不常有，合适的酶切位点跟合适的爱情一样不那么容易碰到。载体和片段的酶切位点难得一致——有时你有我无，有时前后顺序相反，有时两边全都对不上。但是“拼接”双方的任务是必须完成滴，运气不够就要靠技术和经验：有没有同裂酶？有没有能产生同样粘端可互补的酶——举例说 BamH I(G/GATCC)、Bcl I(T/GATCA)、Bgl II(A/GATCT)、Dpn II(/GATC)、BstYI(R

miRNA的靶基因的寻找与鉴定

类似物的瞬时表达方式。miRNA的过表达载体中有插入成熟miRNA、pre-miRNA及pri-miRNA序列三种形式。其中pri-miRNA（含侧翼序列）的方式由于保留了每个microRNA独自的原始天然双臂结构，效果更好，是应用最为广泛的方法。microRNA过表达系统中有CMV启动子（II型启动子）和H1启动子（III型启动子）两种方式供选择。III型启动子（H1、U6等）具有表达效率高、有效的确定终止位置等优点，成为首选。II型启动子适用于pri-miRNA序列中有连续的5个T-导致III