iFluor 555标记鬼笔环肽

【五分钟讲实验】F-actin 怎么看？一篇讲清鬼笔环肽染色和避坑要点

能保持实验终点时细胞形态及 F-actin 骨架结构。 固定后用 PBS 充分洗涤，去除残留固定液。   3. 通透 采用 0.1% Triton X-100 或同类温和通透液处理 5-10 min，使荧光标记鬼笔环肽能够进入细胞并与胞内 F-actin 充分结合。 若样本为膜结构敏感细胞或组织切片，可适当降低 Triton 浓度或缩短通透时间。   4. 封闭与洗涤 根据样本背景及材料特性选择是否封闭。 常用 1-5% BSA 或正常血清室温封闭 20-60 min，以降低非特异性吸附和背景

PKH 不适合染外泌体？看看文献怎么说

体浓度下都不可避免的造成外泌体粒径显著增大。Kulkarni等人[6]研究了静脉注射聚苯乙烯纳米粒子在大鼠不同器官中的生物分布。与 100 nm 颗粒相比，200 nm 颗粒在肝脏和脾脏中的蓄积量更高。 总之，由 EV 的 PKH 标记引起的向较大颗粒的尺寸转变可能会改变细胞摄取水平和内化机制以及 EV 的生物分布，从而降低其作为 EV 示踪剂的有效性。   EvLINK，更优的外泌体染料   EvLINK 505/555 是天津外泌体科技自主研发的基于共价偶联的外泌体膜特异

细胞膜染料+外泌体染料双染策略，彻底解决外泌体摄取实验中的假阳性问题

actin 摄取实验对比，图 Fig.4a 中可以看到 CellLINK 555 标记的清晰的红色膜轮廓，经过 EvLINK 505 标记后的绿色外泌体分散在细胞膜内；Yu 等使用 F-actin 标记细胞膜轮廓，PKH-67 标记外泌体，尽管共聚焦显微镜下观测到的外泌体明亮的绿色荧光，然而该绿色荧光呈弥散状分布，难以较好区分外泌体与细胞膜。 Fig.4 （a）EvLINK 505 标记的外泌体+CellLINK 标记细胞膜和（b）PKH-67 标记的外泌体+F-actin 标记细胞膜摄取