免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

，直到全部溶解，用 HCl 调节 PH 值到 7.4； 2.加 10 ml 10% 的 NP-40； 3.加 2.5 ml 10% 的去氧胆酸钠，搅拌，直到溶液澄清； 4.加 1 ml 100 mM 的 EDTA，用量筒定容到 100 ml，2～8 ℃ 保存； 5.理论上，蛋白酶和磷酸酯酶抑制剂应该在使用当天同时加入（抑蛋白酶肽，亮抑酶肽, 胃蛋白酶抑制剂各 100 μl；PMSF，Na3VO4，NaF 各 500 μl），但是 PMSF 在水溶液中很不稳定，30 分钟就会降解一半，所以 PMSF 应该

用于免疫印迹的细胞裂解液的制备

裂解物。阳性对照是含有已知的或标准量的待测抗原样品，来源于细菌或杆状病毒超常表达系统或已鉴定的细胞系。它可提示免疫印迹是否成功，并能对抗原的相对分子量进行精确比较；如果阳性对照中抗原的量是已知的，可粗略估计出待测样品中抗原的含量。阴性对照给出的是非免疫抗体与待测样品的背景读数。若有可能，再设置一个不含待测抗原的细胞裂解液对照(例如来源于含无效基因的细胞)更利于解释结果。若比较多个不同细胞样品的抗原含量，则需考虑样品标化问题。例如，若进行有意义的比较，需校正样品的总蛋白量，或校正细胞数。测定样品中蛋白质浓度

免疫共沉淀实验指南

-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集