支原体检测试剂盒

MycoplasmaFree支原体检测试剂盒说明书

• 产品信息

产品名称	产品编号	产品规格	储存条件
MycoplasmaFree支原体检测试剂盒	FBMC002	10 rxns	-20 ℃
MycoplasmaFree支原体检测试剂盒	FBMC003	20 rxns	-20 ℃
MycoplasmaFree支原体检测试剂盒	FBMC004	50 rxns	-20 ℃

• 产品描述

  细胞培养是一个动态的连续过程，细胞通常会对操作失误或污染物有所反应，这些反应往往表现出不正常的细胞状态或培养基外观。如果受到支原体污染时，细胞形态较之无明显变化，极易被忽视，往往直到污染非常严重时才能发现。受污染的细胞膜上可能有几百个支原体，这些支原体竞争营养并释放有毒的代谢产物，严重影响实验结果。
研究表明，至少二十多种支原体能污染细胞，其中最常见的有：口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、人型支原体、唾液支原体、肺支原体等。培养细胞的支原体污染率在4%-92%不等，其污染来源包括工作环境、操作者本身（一些支原体是人体的正常菌群）、培养基、血清、细胞交叉污染、实验器材和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
Fubio支原体检测试剂盒主要采用PCR方法对各种生物材料（如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等）支原体感染的检测。本试剂盒综合了几个优势：灵敏、特异、快速并且可以用直接用细胞培养上清液检测。本制品通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中的支原体，所用引物为根据支原体16S rRNA序列保守区域设计，只特异性扩增支原体DNA，检出灵敏度与特异性均较高。PCR扩增及电泳分析只需数个小时，操作方便简单。
本试剂盒可检测所用的莱氏无胆甾原体、支原体、螺原体等120余种亚种。

 

• 产品组分

组分名称	组分说明	规格
Reaction Mix	酶、引物混合物	100μl/200μl/500μl
Positive control	阳性对照	30μl /60μl/150μl
Negative control	阴性对照	30μl /60μl/150μl
Nuclease-Free H2O	无核酸水	500μl/1 ml/2.5ml

• 运输与储存

冰袋运输，收到产品后请于-20℃低温保存。

• 保质期

1年
 

• 操作步骤

1. 待检细胞样品准备
(1)将待检细胞换成无抗生素的完全培养基，至少培养3天以上且融合度达70%-90%。
(2)收集1ml细胞上清液， 1500 rpm离心5min , 取离心后的上,900µL转移到新EP管中再从900μL中吸取100μL留存备用。
（3）将步骤（2）中900μl再次使用12000rpm离心10min，弃去上清，用50ul Nuclease-Free H2O重悬。
（4）将步骤（3）中重悬样品用95'C:沸水浴中煮5min，用于支原体检测。

2.PCR体系配制
(1)按照下面PCR体系配置PCR预混体系(25µ1/反应）：

体系组分	体积（每反应）
Reaction Mix	10 μl
样品/ control	3 μl
超纯水	12 μl
	25μl

注意：添加模板时，应减少空气流动，注意交叉污染；因PCR反应极其灵敏，为防止出现假阳性结果，建议加样时最后加阳参。
(2) 加完所有待检样品后，振荡器上混匀，简短离心后，进行PCR扩增，反应程序如下：

温度	94℃	94℃	60℃	72℃	72℃	4℃
时间	5 min	30 S	30 S	30 S	10 min	∞
循环数	1	35			1	1

3.PCR 产物的电泳检测
(1)   配置1%的琼脂糖凝胶，稍冷后加入核酸染料 , 注入凝胶模中，冷却凝固后，即可用于电泳。
(2)   在每管PCR产物中加入loading Buffer , 取8-10µL进行上样，Marker样5-10µL。
(待) 电泳：130V电泳30min (根据电泳仪情况，适当调整时间）。
(3)   电泳结束后取出凝胶千成像仪上抇照，并保存。
4. 结果判断
产物大小在370bp左右。



 

• 注意事项

1. 为了您的安全和健康，使用本品时请穿实验服，并配戴乳胶手套和口罩后操作。
2. 实验时，试剂盒中的每种试剂在使用前应充分融化，并上下颠倒多次以充分混匀，请勿激烈振荡。
3. 反应管中加好所有的试剂后，应尽快上PCR仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。
5结果异常时，建议复检。
6结果为弱阳性时，建议将100μL留存上清继续培养3-4天，再次检测。
本产品仅供科研用途！