BJ5183-AD-1 Electro

BJ5183-AD-1 Electro

BJ5183-AD-1  Electroporation-Competent Cell

产品货号： JK-G87004                  

保存条件： -80℃   

产品规格 :
 

BJ5183-AD-1 Electro​	5×50μl
	50×50μl

基因型

endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr) [pAdEasy-1 (Ampr)]

简要说明

BJ5183-AD-1 是携带了腺病毒质粒pAdeasy-1 的BJ5183菌株。-JKBioBJ5183 菌株是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统常用的感受态细胞。-JKBio BJ5183 菌株含有 sbcBC recBC 双重突变，赋予 BJ5183 细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒骨架质粒的重组。endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。

BJ5183-AD-1菌株细胞中已经提前转入了腺病毒质粒 pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]，赋予该菌株氨苄抗性，在病毒质粒构建时，只需转入线性化的目的质粒即可，简化了实验步骤，提高了病毒质粒重组概率。Strr 赋予 BJ5183-AD-1菌株链霉素抗性。-JKBio -JKBio -BJ5183-AD-1 电击感受态细胞适用于普通质粒和大质粒的构建，经特殊工艺制作，pCAMBIA2301 质粒(size:1163bp)检测转化效率>1×106 cfu/μg DNA。

注意事项

1. 加入DNA 时体积不应大于感受态体积的1/10。

2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。

3. 当DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。

4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

6. 对于连接产物转化， 转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液 (10 mMTrisHCl,pH7.5;1 mMEDTA)重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖0.6cm)避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。

8. 电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

操作说明

1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5分钟，待其沥干水分，正置 5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置 5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的BJ5183-AD-1电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； 

B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA 后加入适量 TE缓冲液 (10mM TrisHCl, pH7.5;1mM EDTA)重悬，DNA 浓度不超过100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态

3. 用200 μl枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5. 立即 向电击杯中加入1000 μl不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空50ml管中，并用1ml SOC轻柔冲洗电转杯并转移到50ml管中，另补加3ml SOC培养基， 37℃，200 rpm复苏60分钟。
6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养过夜。