- ¥420 - 1600
- 晶抗生物
- JK-G87007
- 国内
- 2025年06月11日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
32
- 英文名：
BJ5183 Electroporation-Competent Cell
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
5×50ul/20×50ul
| 规格： | 5×50ul | 产品价格： | ¥420.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 20×50ul | 产品价格： | ¥1600.0 |
BJ5183 Electroporation-Competent Cell
产品货号： JK-G87007
保存条件： -80℃
产品规格 :
| BJ5183 Electro | 5×50μl |
| 20×50μl |
基因型
endA1sbcBCrecBCgalKmet thi-1bioThsdR(Strr)
简要说明
Stable 电击感受态细胞只能用于电击转化，BJ5183 是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统常用的感受态细胞。-JKBio BJ5183 菌株含有 sbcBCrecBC双重突变，赋予 BJ5183 细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒质粒{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]或pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重组。
endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组 DNA 的稳定和高纯度质粒DNA的提取。Strr 赋予 BJ5183菌株链霉素抗性。-JKBio -JKBio-BJ5183电击感受态细胞适用于普通质粒和大质粒的构建，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。
注意事项
1. JKBio加入DNA 时体积不应大于感受态体积的1/10。
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6. 对于连接产物转化， 转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液 (10 mMTrisHCl,pH7.5;1 mMEDTA)重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100ng/μl。过高浓度
连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖0.6cm)避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。
8. 电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
操作说明
1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5分钟，待其沥干水分，正置 5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置 5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的BJ5183电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19；
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA 后加入适量 TE缓冲液 (10mM TrisHCl, pH7.5;1mM EDTA)重悬，DNA 浓度不超过100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态
3. 用200 μl枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 立即 向电击杯中加入1000 μl不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空50ml管中，并用1ml SOC轻柔冲洗电转杯并转移到50ml管中，另补加3ml SOC培养基， 37℃，200 rpm复苏60分钟。
6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养过夜。
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文献和实验Generation of Recombinant Adenovirus Using the Escherichia coli BJ5183 Recombination System
here uses homologous recombination machinery of Escherichia coli BJ5183 to construct plasmids used in generation of adenoviral vectors. With this method, no ligation steps are involved in generating the plasmids, and any region of the adenoviral genome
Electro-elutionofnucleicacidsfromagaroseandpolyacrylamidegelslides
Principle The nucleic acids contained within the gel slice are electrophoresed
1、准备工作1.1 将水浴箱内部清洁干净后放入无盐水至标示刻度。1.2 将盛有所需溶液的1000ml烧杯放入水浴箱中。1.3 将吊篮悬挂于金属支架上，调节水位高度，使吊篮上升时筛网在水面下25mm处，下降时距底25mm，然后取下吊篮备用。2、正常工作2.1 插上电源，然后按电源开关接通电源，电源指示灯亮，仪器启动。2.2 时间预置仪器开机后，系统处于初始状态，自动定时系统自动预置为15秒，时间数码管显示窗显示时间数值为015。如果需要改变预置时间数值，则可以按一下时间键，预置时间数值变为20
