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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
42
- 英文名:
TOP10 Chemically Competent Cell
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海机纯实业有限公司
- 保存条件:
低温保存
- 规格:
20×100ul/100×100ul
| 规格: | 20×100ul | 产品价格: | ¥240.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100×100ul | 产品价格: | ¥1020.0 |
TOP10 Chemically Competent Cell
产品货号: JLC-G015
保存条件: -80℃
产品规格 : 20×100μl 100×100μl
产品介绍 :
基因型 :
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
简单说明 :
TOP10菌株来源于MC1061菌株, 是目前实验室常用的感受态细胞之一,基因型与DH10B高度类似(DH10B为galE15型,而TOP10为galU型)。 TOP10生长速度快(比DH5α快,但比Mach1-T1生长速度慢),10小时可见克隆, recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆,蓝白斑筛选等实验,具有链霉素抗性。High5TM系列TOP10感受态细胞经特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg。
操作说明 :
1. TOP10感受态细胞放置1.放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目 的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养基,混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少13h。
注意事项 :
1. 感受态细胞在冰上融化。冰上放置大约5分钟即可融化,融化后8分钟内加入质粒,否则会影响转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。
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文献和实验TOP10 chemically competent cells
Overview This protocol is a variant of the Hanahan protocol [1] using CCMB80 buffer for DH10B, TOP10 and MachI strains. It builds on Example 2 of the Bloom05 patent as well. This protocol has been tested on TOP10, MachI and BL21(DE3) cells
The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
xiaomage124 请问丁香园里的战友们,谁做过点突变?TOP10F'是不是甲基化菌株?恳请指教,多谢啦!:)有请好人帮我分析下TOP10F'菌株是否有甲基化功能,因为我要做点突变,如果这个菌株具有甲基化外源质粒DNA的功能就可以了,以下是此菌株对应的基因型,多谢啦!:) F'{lac Iq Tn10(TetR)} mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 △lacⅩ74 recA1 araΔ139Δ(ara










