Plasmid MiniPrep Kit
质粒小量提取试剂盒
产品目录号:121131
保存条件:本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下,保存一年;RNase A -20℃保存一年。
产品说明
本试剂盒采用硅胶吸附柱专一地吸附DNA,通过离心洗脱质粒DNA,适合于从1-4 ml培养的细菌细胞中高效地提取质粒DNA。用本试剂盒提取得到的质粒DNA可用于PCR、酶切、转化、测序等分子生物学实验。
试剂盒组成
目录号
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Components
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50 T
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121132
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Resuspension Buffer (S1)
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15 ml
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121133
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Lysis solution (S2)
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20 ml
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121134
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Binding solution (S3)
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15 ml
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121135
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Wash Buffer (W4)
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10 ml
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121136
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Elution Buffer (E5)
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5 ml
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121137
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RNaseA(10 mg/ml)
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150 μl
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121138
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Spin Columns
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50 sets
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操作步骤
*使用前将RNase A全部加入Resuspension Buffer (S1)中,摇匀,于4℃存放。
*加40 ml无水乙醇到10 ml(50T)W4中。
1、 取1-4 ml过夜培养的细菌菌液12,000 rpm 离心1分钟,尽量吸尽上清。
2、 加入250 μl Resuspension Buffer (S1) (含RNase A),震荡悬浮细菌沉淀,不应留有小的菌块。
3、 加入350 μl Lysis solution (S2),温和地上下翻转混合4-6次,裂解菌体,溶液变清亮(不宜超过5分钟)。
4、 加入250 μl Binding solution (S3),混匀,形成块状凝集,室温静置2分钟。
5、 12,000 rpm 离心5分钟,小心吸取上清加入吸附柱中。
6、 12,000 rpm 离心1分钟,弃流出液。
7、 向吸附柱中加入650 μl Wash Buffer (W4),12,000 rpm 离心1分钟,弃流出液。
8、 12,000 rpm 离心1分钟,彻底去除残留的Wash Buffer (W4)。
9、 将吸附柱置于一干净的离心管中,在柱的中央加入30-50 μl Elution Buffer (E5)或去离子水(pH>7.0)室温静置1-2分钟(Elution Buffer (E5)或去离子水在60-70℃水浴预热,使用效果更好)。
10、12,000 rpm 离心1分钟,洗脱DNA,洗脱出的DNA用于下步实验或-20℃保存。
注意事项
*所有离心在室温下进行。
*加入Lysis solution (S2)后,操作一定要温和,剧烈混合会导致基因组污染。
*若Lysis solution (S2)有混浊或沉淀,可在37℃水浴中加热几分钟,且使用后立即盖紧盖子,以免pH发生变化。
*控制起始的菌液量在1-4 ml,菌量大会导致裂解不充分,影响质粒DNA的得率及纯度。