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文献和实验人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
。 5. 每孔加入2ml 1X PBS (BSS-1006-B)稀释AccuMax™溶液(A7089)。将细胞悬浮液置于50ml锥形管中。用1ml 1X PBS冲洗每孔,收集任何剩余的细胞,并加入到50ml锥形管中。移液器上下吹打几次以实现单细胞悬浮状态。 6. 室温下,细胞悬液130 x g离心5分钟。 7. 吸出上清液。 在 2 mL 的 AFE 诱导培养基 I (SCM305) 中重新悬浮细胞沉淀。 使用自动细胞计数器或血细胞计数器对细胞进行计数。 在 PBS 中配制4μg/mL的纤连蛋白 (F
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更好。 18. 最好使用白色的 96 孔 SBS 板,因为白色板会增强荧光。 19. 我们选用了较高量的 dNTP,因为在长达 4 h 的重组装反应中 dNTP 可能降解。 20. 选择此体积以确保多样性。 21. 基因中尿苷掺入的所有可能类型的总和是 1,但是所有片段的概率总和要大一些,因为每种类型可以产生好几种片段。 22. 这个计算包括长度为零碱基的片段,当两个尿嘧啶紧挨在一起时会产生这种情况。 23. 同位素放射自显影的胶可应用 X 射线光片显影
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