活性氧(ROS)检测试剂盒北京供应商

特别提示：包括活性氧(ROS)检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：活性氧(ROS)检测试剂盒
英文名称：Reactive Oxygen Species Assay Kit
产品货号：SY0802
产品规格：1000T

本试剂盒采用了银染的方法，用于对聚bǐng烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶中的微量蛋白质进行检测。生化实验中蛋白质通过凝胶电泳的方式分离后需经过染色才能肉眼可见，染色方法有两种：1）染料染色法；2）金属染色法。前者主要是考马斯亮蓝染色法，后者主要采用银染法。前者操比较简单，省时；但是后者具有较高的检测灵敏性，可检测到10-100 ng蛋白质，比考马斯亮蓝染色法灵敏100多倍。

产品组份：
显影底物液（10×）————1×100ml
敏化底物液（5×）————3×90ml
银溶液（10×）—————1×20ml
溶液I（5×）——————1×16ml
溶液II—————————1×10ml
溶液III————————1×2ml
终止液（10×）—————2×100ml

使用方法
以10cm2凝胶为例，不同凝胶大小可按比例调整增敏液、显色液和终止液的体积。
所有浓缩液使用前用去离子水稀释至1×工作液，水平摇床的转速设置在55rpm左右。
1）固定：按体积比，冰cù酸：无水乙醇：去离子水=1：4：5配制100ml固定液，将电泳后的凝胶放入固定液中，室温条件置于水平摇床上，缓慢震荡固定120min；
2）增敏：用去离子水分别稀释5×敏化底物液，以及5×溶液I至1×工作液。取65.5ml 1×敏化底物液加入4ml 1×溶液I、500μl 溶液II、30ml 无水乙醇混匀即得到增敏液。然后将凝胶放入100ml增敏液中，室温条件置于摇床上摇动60min；
3）洗涤：用去离子水漂洗30min，期间更换3~5次。
4）银染：用去离子水稀释10×银溶液至1×工作液。取10ml 1×银溶液加入40μl 溶液III，加入去离子水补足体积至100ml即得到银染液。然后将凝胶放入100ml银染液中，室温条件置于摇床上摇动60min；
5）洗涤：用去离子水漂洗银染后的凝胶4次，每次1min；
6）显色：用去离子水稀释10×显影底物液至1×工作液。取40ml 1×显影底物液加入40μl 溶液III、3μl 1×溶液I，加入去离子水补足体积至100ml即得到显色液。然后将凝胶放入100ml显色液中，室温条件置于摇床上摇动6min。【注意】：显色 的时间可控制在1-15min，直至出现比较理想的预期蛋白条带。
7）终止：用去离子水稀释10×终止液至1×终止液。取100ml 1×终止液，将显色后的凝胶放入其中，室温条件置于摇床上摇动，反应40min；
8）洗涤：用100ml去离子水洗30min，期间更换2次。
9）照相：保存显色出的蛋白质条带并记录。

注意事项
1）显色过程较快，要注意把握时间，避免染色过度。
2）所用器皿要很洁净，不要用手直接接触，以免杂蛋白污染。
3）清洗用水尽量用高纯度去离子水如ddH2O，可以减少背景着色。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：4℃，有效期一年。

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