3传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37℃预热,将旧培养基移至离心管中,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于室温孵育消化(第一次消化需置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入2ml旧培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,移至含有旧培养基的离心管,1000rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。