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见产品
- 保质期:
1年
- 英文名:
Protease Inhibitor Cocktail (EDTA-Free, 100X in DMSO)
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订购(3-4天)
- 供应商:
Abmole
- 规格:
1mL
产品描述:
本产品是由 6 种独立的蛋白酶抑制剂(不含 EDTA): AEBSF、Aprotinin、 Leupeptin 、Bestatin、E-64、Pepstatin A 按照优化的配比配置而成的蛋白酶抑制剂混合物。其作用的靶点分别为丝氨酸蛋白酶,丝氨酸半胱氨酸蛋白酶,氨肽酶,半胱氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶等,广泛作用于各种蛋白酶,可称之为广谱蛋白酶抑制剂。
使用方法:
1. 本产品适用于哺乳动物细胞及组织的蛋白质提取及纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫共沉(Co-IP),免疫荧光(IF) ,免疫组织化学(IHC),激酶测定(kinase assay)和抗体、酶诊断试剂盒(DigKit)等。
2. 实验时,按照 1:100 的容积比,将 Cocktail 预先加入在已准备好的实验体系中, 轻轻混合均匀。
保存条件:
本产品应于-20℃环境下密封保存,产品有效期为 2 年。使用时可短时间放置于常温或 4℃中,用毕应立即放回-20℃中保存。
注意事项:
1. 本产品不含 EDTA, 为 100× DMSO 储存液形式。使用时应调整 Cocktail 浓度为 1×,若有蛋白酶含量丰富的细胞或组织,可适当增加 Cocktail 在实验体系中的浓度。
2. 本产品置于-20℃保存时,DMSO 呈现冰晶状态,此属于正常现象,非产品质量问题。
3. 本产品仅供科研使用。
常见问题解答:
1. 蛋白酶抑制剂Cocktail有哪些优势?
回答:针对多种氨基酸的靶点,对目的蛋白进行全方位的保护,使其免受内源性蛋白酶的降解,蛋白的得出率较高,大大提高实验效率。
2. 可以配合细胞裂解液一起使用吗?
回答:可以,这样可以充分的裂解细胞或组织中的蛋白,有效降低蛋白质的降解。
3. 为什么需要用DMSO溶解?可否换成其他溶剂?
回答:蛋白酶抑制剂Cocktail较易溶解于DMSO,且DMSO通常不会影响实验结果,而且性质稳定,利于保存和运输。因此暂不考虑其他溶剂。
4. 实验时误将其放置常温下,会不会造成试剂变质?
回答:短时间放置于常温下是可以的,不会造成试剂变质,因为蛋白酶抑制剂通常比较稳定。如果实验需要在常温下进行,建议将其置于冰块操作,用毕后迅速放置-20℃保存。同时应尽量避免反复冻融。
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文献和实验检测蛋白磷酸化一定要加磷酸酶抑制剂!!除此以外还应该加蛋白酶抑制剂。 http://www.millipore.com/techpublications/tech1/mcproto402 Protease Inhibitors · EDTA: 1 mM · PMSF: 1 mM · Aprotinin, leupeptin, pepstatin: 1 µg/ml each Phosphatase Inhibitors ·
DTT, 0.5% CA and a cocktail of protease inhibitors) Lysis buffer F 100 μL SDS sample solution (1% w/v SDS, 0.375 M Tris-HCl, pH 8.8, 50 mM DTT, 25% v/v glycerol) ●CA、蛋白酶抑制剂混合物和DTT在临用前加入。 (8) 蛋白酶抑制剂混合
酶活性。因此,添加蛋白酶抑制剂对于防止目的蛋白的降解从而完成免疫沉淀实验非常关键。一般主要通过添加EDTA抑制金属蛋白酶,通过Protease Cocktail(多种蛋白酶抑制剂混合物)可以抑制蛋白酶。 5. 去垢剂对于免疫沉淀实验尤其是免疫共沉淀实验是一个非常关键的因素。不同的去垢剂种类和不同的去垢剂浓度主要通过影响以下三个因素来影响免疫沉淀效果: (1)细胞质/器膜的通透性:因为许多目的蛋白都定位在细胞器中,所以必须先将这些蛋白释放出来,抗体才能与之反应。 (2) 膜蛋白的释放:许多膜蛋白
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