- ￥1230
- LSM Bio
- 进口
- PVT2342
- 2025年09月21日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20摄氏度
- 保质期：
3个月
- 英文名：
pGreen- puro
- 库存：
100
- 供应商：
LSMBIO
- 规格：
2ug
pGreen-puro
Search name
pGreen-puro,Plasmid pGreen-puro,pGreen-puro vector
pGreen-puro Informaiton
Promoter: CMV
Replicon: pUC ori
Terminator: SV40 poly (A) signal
Plasmid classification: virus series, lentivirus cloning vector
Plasmid size: 7.8kb
Prokaryotic resistance: Amp
Screening markers: Puro
Cloned strain: Stbl3
Culture conditions: 37 centigrade, aerobic LB
Expression host: mammalian cells
Induction mode: no induction, instantaneous expression
5'sequencing primers: CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'sequencing primers: primers designed according to sequence
Use:Lentiviral
pGreen-puro Description
pGreenPuro Vector is designed to express a single-stranded shRNA sequence with a fold-back stem-loop structure (also known as a “hairpin”) from a RNA polymerase III H1 promoter .The hairpin-type siRNA (shRNA) template oligonucleotides need to be cloned into unique BamHI/EcoRI sites located just downstream of an H1 promoter. The pGreenPuro™ vector needs to be linearized by restriction digest with BamHI and EcoRI, and purified to remove the stuffer fragment. When linearized, the vector contains two unique 5’ overhangs to facilitate directional cloning of shRNA template oligos with minimal self-ligation background . When the shRNA construct is expressed from constitutive H1 promoter and terminated with the TTTTT sequence, the shRNA transcript folds into the hairpin structure, which is recognized by the DICER enzyme, cleaved to form a functional ds siRNA and transferred to a RISC complex for selective digestion of complementary target mRNAs .
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文献和实验型质粒 （3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地； （4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位 Ampr（试一试）。 （5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。 无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体 DNA 进行切割，获得线性载体分子，以便于与目的基因片段进行连接。 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核
表达都要根据载体的说明选择相应抗生素，不是可以随便用的。做细胞表达时，如果只是要求短时表达（即所谓瞬时转染），可不必用细胞抗生素。丁香园网友mikke_2000认为：应该是质粒转染细胞，筛选出稳定表达新基因的细胞系吧。筛选所选用的抗生素是跟你转染所用的质粒上所带的真核筛选抗性基因有关的。最常见的载体上带有新霉素抗性基因neo，所以筛选的时候用G418，如果带有嘌呤霉素的抗性基因就要选用puro。另外如果双转染，要考虑到两种质粒的筛选抗性的兼容。G418等的筛选浓度最好也用预试验摸一下~~
EGFP 荧光表达。 检测结果显示靶点一和靶点二均有效果，靶点一的效果优于靶点二。 TP53 基因敲除 293T 细胞筛选 实验步骤 1) 转染前 24 小时将 293T 铺到 6 孔板中。 2) 按照下列体系制备质粒稀释液 pCas9/gRNA1-P531 0.7ug pLV-EGFP（2A）puro 0.1ug DMEM 培养基 X ul 总体积 50ul 3) 准备转染
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