植物核蛋白提取试剂盒北京供应商

特别提示：包括植物核蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：植物核蛋白提取试剂盒
英文名称：Plant nuclear protein extraction kit
产品货号：HR0103
产品规格：50T|100T

植物核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解植物核组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(货号HR0389)。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。提取液A长期不用请置-20℃保存。
有效期：一年。
使用前请仔细阅读产品说明书
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

产品特点：
1．使用方便。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂耗材和仪器
● PBS ● 吸头、离心管 ● 移液器 ●冰盒 ● 匀浆机/器 ●离心机 ● 涡旋振荡器 ●冰箱

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1．提取液制备：
每200μl提取液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200-500mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入1-2ml PBS后用匀浆机充分匀浆或者加适量PBS后用Dounce匀浆器充分匀浆。
3．将匀浆用250 目细胞筛过滤；
或者在4℃，100g 力条件下离心1分钟，收集上清，弃沉淀。
4．将滤液在2000g条件下离心5-10分钟，收集沉淀。
5.在沉淀中加入500μl提取液A，充分混匀。
【注】：
●培养细胞1000g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞后用PBS洗涤2次，然后直接加入提取液A重悬。
● 大约每300μl细胞压积中加入1ml 提取液A。
6．将细胞悬液置振荡器上37℃或室温振荡1-3小时。
【注】：
● 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。
● 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至12小时以上过夜处理以提高核蛋白得率。
7.在2000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
8.在沉淀中加入1ml 提取液B，充分混匀。
9．置振荡器振荡30分钟。
10.在2000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
11.在沉淀中加入100-200μl冷的提取液C，高速涡旋振荡5秒。
12．置4℃振荡30-40分钟，至无明显沉淀。
【注】：
● 没有持续振荡条件，也可静置，中间每隔几分钟充分混匀。
13.在4℃，16000g条件下离心10分钟。
14．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
15．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
植物核蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，尽可能增加样本量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数，并适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，
不必进行超声处理。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

我公司销售的植物核蛋白提取试剂盒北京供应商，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。