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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 细胞类型:
大肠杆菌
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 库存:
483
- 英文名:
E.coli DH5α Strain
- 运输方式:
干冰运输
- 规格:
1 mL
特别提示:包括大肠杆菌DH5α菌种在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:大肠杆菌DH5α菌种
英文名称:E.coli DH5α Strain
产品货号:BTN12-11y
产品规格:1 mL
本菌种是美国科学家D.Hanahan在1983年首次报道的K-12系大肠杆菌菌株,它是以DH1为基础构建的,是分子生物学中最常用的用于克隆的大肠杆菌菌株。
产品特点:
1.转化效率比DH1更高,适用于分子克隆。
2.脱氧核糖组成型合成,适合扩增制备高拷贝和大型质粒。
3.携带?-半乳糖苷酶?片段,如果外源基因携带此酶的?片段,则可以进行蓝白斑筛选重组子。
4.内源核酸酶EndA1缺失,提取的质粒DNA残留DNase少,质量高。
5.基于RecA的三套重组系统均缺失,质粒在复制过程发生重组、丢失和串环的可能性降到最低,使得插入片段稳定。
6.EcoK限制功能缺失(hsdR-),不能酶切在EcoK位点没有甲基化的DNA,但其修饰功能完整,故可以用EcoK位点非甲基化质粒通过本菌株制备其对应的甲基化质粒,后者可用来转化限制EcoK功能正常(基因型为hsdR+)的K-12系的大肠杆菌。
7.本菌株对常见抗菌素没有抗性。
基因型:
大肠杆菌DH5菌种的基因型是:K-12,F-,φ80,-,Δ(argF-lac)169,lacZ58(M15),ΔphoA8,glnX44(AS),deoR481,rfbC1,gyrA96(NalR),recA1,endA1,thiE1,hsdR17(各文献上报道的基因型稍微有所不同,此处采用美国耶鲁大学Coli Genetic Stock Center的资料)。
大肠杆菌DH5菌种基因型符号及其含义列表如下:
| 基因型 | 表现型 |
| K-12 | K-12系的所有菌种默认都携带F因子和λ、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因,其产物可对甲基化的CG切割。 |
| F- | 此菌株缺失F因子 |
| λ- | 此菌株缺失λ原噬菌体 |
| φ80 | 携带φ80原噬菌体 |
| Δ(argF-lacZ)U169 | 也叫ΔlacU169,来于Hfr3000U169菌种,位于此区域的lac操纵子和过氧化氢敏感基因缺失,使细菌抗过氧化氢,实际缺失mmuP到argF和lac到mhpD的区域,实为Δ(mmuP-mphD) |
| rfbC1 | LPS合成缺失,缺失LPS有助于提高转化效率 |
| deoR481 | deo操纵子阻遏蛋白失活,脱氧核糖组成型合成,适合扩增制备质粒 |
| endA1 | 核酸内切酶I缺失 |
| glnX44(Am) | 同supE和 glnV,使琥珀终止子编码谷氨酰胺,为部分噬菌体生长所需 |
| gyrA96 | DNA促旋酶失活,导致对萘啶酮酸和荧光kuí啉的抗性 |
| hsdR17 | EcoK系统的限制性内切酶Eco失活,不酶切非甲基化的Eco位点 |
| ΔlacZ58M15 | 原ΔlacZM15,携带来于M15菌株的、编码β-半乳糖苷酶的ω片段,与编码β-半乳糖苷酶α片段的质粒互补可,恢复酶活性,用于蓝白斑筛选 |
| recA1 | ATP依赖型重组酶失活,recBCD、recE和 recF三条重组路径均复丧失,重组率降低1万倍。适合扩增有回文结构的高拷贝质粒 |
| thiE1 | 原thi-1,不能合成硫氨(维生素B1) |
保存条件:-80℃,有效期一年。
我公司销售的大肠杆菌DH5α菌种北京现货,大肠杆菌DH5α菌株质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验以下是我构建载体的思路,但自己心里没底,不知是否可行,请各位老师指教! 目 的:构建hPOT1正反义基因真核表达载体 材料 DH5α大肠杆菌由学校细胞生物教研室提供;含全长hPOT1 cDNA的pLPCNMyc POT1质粒由美国Rockefeller大学的de Lange教授惠赠;pcDNA-3.1(-)真核表达载体购自美国Invitrogen公司;限制性内切酶BamHⅠ、Xho Ⅰ、Nhe I、T4DNA连接酶和牛小肠碱性磷酸酶(CIP)购自美国Promag公司;超纯
19质粒衍生而来的具有2 961bp的质粒载体。因此用Eco RⅠ酶切则应到空载pBluescriptⅡKS(-)载体(2.96kb)和人Bcl-2 cDNA片段(1.9kb)。配制成2g/1μl。 2.大肠杆菌DH5α 此为DNA扩增菌。 实验步骤 1.细菌感受态细胞的制备 1) 将DH5α菌种划线于LB琼脂板上,37℃培养过夜。 2) 挑取单菌落接种于5ml LB培养基中,37℃振荡培养培养过夜
连接等需要高转化效 率的情况 。使用本试剂盒操作简单,细菌培养好后仅需60分钟左右即可完成超级感受态细菌的制备。本试剂盒适用于绝大部分常见的大肠杆菌,包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。对于一些用于蛋白表达或病毒质粒构建 的特殊大肠杆菌也适用,制备出来的感受态菌转化质粒肯定没有问题,但如果转化连接产物有时效果不如DH5α等其它常见的细 菌。 本试剂盒提供了专门用于制备超级感受态的特殊细菌培养液,可以提高制备出来的感受态菌的转化效率,同时也方便了用户,不 必自行配置相应的培养
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