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Ni Sepharose excel 是一种用于纯化带组氨酸标签的镍柱亲和蛋白层析填料,当样本中含有螯合剂时,可将镍离子脱落降至最低,同时最大化蛋白回收率。
Ni Sepharose excel由90μm高度交联的琼脂糖珠组成,其上已经结合了螯合配体Ni2+离子。这款填料与Ni2+离子有极强的结合力,打破了常规Ni填料的局限,能够耐受100 mM的EDTA,大大扩展了缓冲液的兼容性,从而省去了置换缓冲液的操作步骤。
Ni Sepharose excel具有较高的耐碱性,可耐受1 M的NaOH,从此彻底清洗Ni填料不再需要先脱镍步骤,直接使用NaOH就可以彻底清洗,避免交叉污染,节省时间也提高了效率。
- 用途广泛 — 适用于昆虫和 CHO 细胞等真核样本以及大肠杆菌等细菌样本。
- 直接上样 — 可直接上样真核细胞培养上清液,无需预处理通常会引起镍脱落的样本。
- 保持高达 10 mg/mL 填料的结合载量。
- 简化样本处理 — 与传统工作流程相比,所需步骤更少。
- 灵活的规格 — 提供预填充的填料和散装填料,用于优化筛选和带组氨酸标签的蛋白制备级纯化。
用于 IMAC 层析的抗乙 胺四乙酸 (EDTA) 填料
Ni Sepharose excel 是一种 IMAC 填料,预填充有与螯合配基牢固结合的镍离子。即使在 10 mM 乙 二胺四乙酸 (EDTA) 中培养 24 小时后,镍离子仍然与配基结合。
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文献和实验填料 根据亲和层析的几种应用方向,亲和层析的填料主要分为标签蛋白纯化填料、抗体及抗体片段纯化填料、族特异性亲和填料以及预活化填料四种。 1. 标签蛋白纯化填料 为了简化纯化流程以及方便后期的检测,在进行重组蛋白表达时往往会加入标签。常用的标签包括His标签、GST标签、Strep标签及MBP标签等 (表8)。His标签由于分子量很小,几乎不会影响靶蛋白结构和功能而被广泛使用。GST和MBP标签常用于促进蛋白的可溶表达,尤其对于难表达的真核细胞蛋白和病毒蛋白有很好的促溶表达能力。Strep
大家提供以下标签蛋白纯化的填料和多种规格的预装柱。 His 标签蛋白填料简介 His 标签蛋白填料的选择 1 科研微量分析和制备 Cytiva 经典 Ni 填料 Ni Sepharose 6 Fast Flow(FF)和Ni Sepharose High Performance(HP)适用于实验室级别目标蛋白的分析和制备。如需快速进行目标蛋白的捕获,可选择 Ni Sepharose 6 Fast Flow(FF)填料,它可帮助您节省一半的时间以提高课题研究的进度。如对蛋白
Expi Supernatant 进行培养。 纯化过程中,选择柱体积为 0.2 ml 的三种纯化柱:Ni Sepharose 6 FastFlow, Ni Sepharose Excel, 和 Strep-Tactin®XT 4Flow®。 分别用其纯化 60CV (column volume, 柱体积) 和 120CV 的样品,并保持上样样品中的蛋白质含量在纯化柱最大结合载量 80%-95 %。 二、实验结果 01 对比蛋白质回收效率 对于不同的填料,可以从洗脱组分中回
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