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25 ml
概述
Ni Sepharose excel 是一种用于纯化带组氨酸标签的镍柱亲和蛋白层析填料,当样本中含有螯合剂时,可将镍离子脱落降至最低,同时最大化蛋白回收率。
Ni Sepharose excel由90μm高度交联的琼脂糖珠组成,其上已经结合了螯合配体Ni2+离子。这款填料与Ni2+离子有极强的结合力,打破了常规Ni填料的局限,能够耐受100 mM的EDTA,大大扩展了缓冲液的兼容性,从而省去了置换缓冲液的操作步骤。
Ni Sepharose excel具有较高的耐碱性,可耐受1 M的NaOH,从此彻底清洗Ni填料不再需要先脱镍步骤,直接使用NaOH就可以彻底清洗,避免交叉污染,节省时间也提高了效率。
• 用途广泛 — 适用于昆虫和 CHO 细胞等真核样本以及大肠杆菌等细菌样本。
• 直接上样 — 可直接上样真核细胞培养上清液,无需预处理通常会引起镍脱落的样本。
• 保持高达 10 mg/mL 填料的结合载量。
• 简化样本处理 — 与传统工作流程相比,所需步骤更少。
• 灵活的规格 — 提供预填充的填料和散装填料,用于优化筛选和带组氨酸标签的蛋白制备级纯化。
用于 IMAC 层析的抗四乙酸 (EDTA) 填料
Ni Sepharose excel 是一种 IMAC 填料,预填充有与螯合配基牢固结合的镍离子。即使在 10 mM 四乙酸 (EDTA) 中培养 24 小时后,镍离子仍然与配基结合。
基于这种强大的结合能力,可将通常导致金属离子脱落的样本直接装到该填料上,而无需进行费时的预处理。因此,这种用于纯化带组氨酸标签的镍柱亲和层析蛋白填料特别适用于纯化分泌到真核细胞培养上清液中的带组氨酸标签的蛋白。
大批量样本的带组氨酸标签纯化
Ni Sepharose excel 镍填料具有的流速属性使它非常适合在各种规模下进行纯化。该填料可以处理大量样本,支持手动或自动纯化低浓度的靶蛋白。
成功用于已发表研究
科学家使用 Ni Sepharose excel 镍柱填料从真核和原核样本中纯化带组氨酸标签的重组蛋白质,见如下出版物中的引述:
• 从 BHK 细胞分泌的人转铁蛋白受体 1
• 来自 HEK293 上清液的前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin 9
• 来自大肠杆菌的膜蛋白插入酶 EcYidC,用于结晶
• 来自周质腔提取物的幽门螺旋杆菌粘附素 BabA
便捷的预填充柱
Ni Sepharose excel 镍柱亲和层析蛋白纯化填料还有以下规格可供选择:
• HisTrap excel 层析柱:HiTrap 规格,便于与注射器、蠕动泵或层析系统配合使用。
• His MagSepharose excel:用于小规模纯化和筛选的磁珠。适用于多个并行实验的早期研究阶段。
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文献和实验相关专题 (一) 原理 葡萄球菌A蛋白(SPA)具有与多种哺乳动物 IgG分子Fc段结合的能力,并与不同IgG亚类的结合力有所差别。利用改变PH及离子强度可洗脱结合于SPA-Sepharose CL-4B柱上的IgG或不同的IgG亚类,可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。 (二) 操作步骤 用0.1M PH8.0 磷酸缓冲液 浸泡SPA-Sepharose CL-4B凝胶,15min。按1g干胶200ml
Expi Supernatant 进行培养。 纯化过程中,选择柱体积为 0.2 ml 的三种纯化柱:Ni Sepharose 6 FastFlow, Ni Sepharose Excel, 和 Strep-Tactin®XT 4Flow®。 分别用其纯化 60CV (column volume, 柱体积) 和 120CV 的样品,并保持上样样品中的蛋白质含量在纯化柱最大结合载量 80%-95 %。 二、实验结果 01 对比蛋白质回收效率 对于不同的填料,可以从洗脱组分中回
PREPARATION OF PROTEIN A SEPHAROSE CL 4B BEADS
so that the total volume of beads plus buffer is 2 ml).Blocking and Use1.Remove desired volume of 50% slurry (30 µl of slurry per I.P.or Chip).Put in 15 ml conical tube.2.Spin in table top3.Resuspend beads in cold blocking buffer:T. E.25 ml of T.E0.1% Azide25 µl
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