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- 2025年07月13日
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实验简介
Fluo-4 AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。分子式为C51H50F2N2O23，分子量为1096.95。
Fluo-4 AM在Fluo-3 AM的基础上改进而成，其特点是加载更快并且在相同条件下荧光更加明亮。Fluo-4 AM将Fluo-3 AM结构中的氯原子替换成了氟原子，导致它的最大激发波长会向短波长处偏离12nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长488nm，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度会比Fluo-3强一倍。由于Fluo-4与钙离子的亲和力和Fluo-3相近，所以使用上和Fluo-3也基本相同，可以使用激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪等荧光检测仪器来测定细胞内钙离子浓度的变化。
Fluo-4 AM是Fluo-4的乙酰甲酯衍生物，是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-4 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-4 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内。Fluo-4可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494nm，最大发射波长为516nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为512-520nm。
用于细胞内钙离子检测时，Fluo-4 AM的常用浓度为0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-4 AM的适当溶液和细胞一起在20-37℃孵育10-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-4 AM在细胞内充分转变成Fluo-4。
客户提供的资料
1.实验细胞
2.刺激药物
实验流程
细胞培养——加药刺激——流式上机检测——结果分析
交付结果
1.流式原始数据
2.数据分析结果
3.实验报告，包括仪器，试剂及实验步骤
客户需知
公司仅提供南美血清及DMEM高糖、1640、DMEM/F12等常规培养基进行细胞培养，如需用到特殊培养基或者添加细胞因子，或者更高级别血清，需要客户自行提供。
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文献和实验清洗在三次，加2&；mu；m的Fluo-3/AM，避光，37度，30分钟 2。细胞负载后，用D&；rsquo；-HANKS清洗二次 3。在confocal上分析细胞内钙离子浓度
Fluo-3-Am为一新型的高度特异性Ca2+荧光指示剂，可以灵敏地反映细胞内游离钙离子浓度的变化，Fluo-3-Am进入细胞后经非特异性酯酶脱去Am酯，成为脂溶的Fluo-3留在细胞内，当Fluo-3与细胞内游离钙结合后，其荧光强度是Fluo-3本身的40倍以上，当用480nm波长激发时，其荧光强度与游离钙离子浓度成正比。具体如下：1、钙荧光探针负载；取细胞悬液，加Fluo-3-Am至10μmol/L，置二氧化碳培养箱中孵育1h，其间轻微振荡3次。离心，去掉多余的染料。再用无钙缓冲液反复洗涤
jeremyking 前几天订购了FLUO-4 AM, 因为五一放假，同事就放到4度的冰箱中了，第二天才知道这个事。不知道还能不能用，请各位指教，不然要重新定试剂了。谢谢 jeremyking 自己顶一下，希望有人知道答案 moxucheng 可以用，没问题 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄
