CM-葡聚糖凝胶 C-50

葡聚糖凝胶层析

G-25 (Sephadex-G-25) 【 实验操作 】 1.实验凝胶的制备：商品凝胶是干燥的颗粒，使用时需经溶胀处理，称取4克葡聚糖凝胶G—25，加50毫升蒸馏水，搅拌均匀，在室温溶胀6小时，或沸水浴溶胀 2小时，一般采用后一种方法。再用倾泻法除去凝胶上层水及细小颗粒，用蒸馏水反复洗涤几次，再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次，使pH和离子强度达到平衡，最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡，凝胶可保存在缓冲液内。 2.装柱

葡聚糖凝胶过滤法测定蛋白质分子量方法

柱必须粗细均匀，柱管大小可根据试剂需要选择。一般柱直径(内径)为1cm, 如果样品量比较多，最好用直径2 ~ 3cm的柱。通常柱愈长，分离效果愈好，但柱过长，实验时间长而且样品稀释度大，易扩散，反而分离效果不好。当用作脱盐时，柱高度为50cm比较合适；在进行分级分离时，100cm高度就够了。 装柱时，将柱垂直至于铁架上。在柱中加约1/3柱容积的洗脱液，并赶净滤板下方气泡，使支持滤板底部完全充满液体，然后将柱的出口关闭。把已经溶胀好的凝胶调成薄浆，倾入柱内，胶粒逐渐扩散下沉。当沉积的胶床

葡聚糖凝胶层析脱盐

小。G值表示每克干胶吸水量（mL）的十倍。例如Sephadex G-25其吸水量应为2.5mL/g干胶。常用的葡聚糖凝胶有多种规格，如G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100等。实验中选用何种型号应根据被分离的混合物分子的大小及工作目的来确定（参见附录五）。 2. 分离原理 当混合样液加到凝胶柱上，随着洗脱剂而通过凝胶柱时，分子大小不同的物质受到不同的阻滞作用。颗粒接近或大于网眼的分子，不能进入凝胶的网眼中，在重力作用下它们随着溶剂在凝胶颗粒