丙烯葡聚糖凝胶S-1000

原核表达实验方法

子，则在30 -32 ℃ 培养数小时，使培养液的OD600达0.4-0.6 ，迅速使温度升至42 ℃ 继续培养3 -5h ；如果表达载体的原核启动子为tac 等，则37 ℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG 至终浓度为1 mmol / L。继续培养3 -5h 。(5 ）取上述培养液1 ml ,1000g 离心，1 min ，沉淀，加100 μL 聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后，作SDS -PAGE 检测。2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化1 ）细菌的裂解常用方法有：① 高温珠磨法；② 高压匀浆；③

几种分子筛凝胶及应用

做纯化的人可能经常接触到sephadex，BIO-Gel，sephacryl s-,sepharose BIo-Gel等几种填料，有时会混淆在一起，看到一个贴子较好的介绍了这些填料的区别，希望对大家有用。sephadex(葡聚糖凝胶）：是由葡聚糖苷和3-氯-1，2环氧丙烷以醚键相互铰链而成，不同型号的葡聚糖凝胶用英文字母G表示，如G-25，G-75等，G后面的数字为凝胶吸水量再乘以10。sephacryl：为葡聚糖偶联丙烯基，再和甲叉双丙烯酰胺聚合而成的介质。它有较高的硬度，能承受比普通凝胶更

完整蛋白质从 SDS-PAGE 胶中的电洗脱及其 MALDI-TOF MS 分析

大的蛋白质仍然很困难。 将丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电转移（或电印迹）至膜上，如硝化纤维（NC) 或聚合体膜，是另一种回收完整蛋白质的方法。大部分膜与 MALDI-TOF  MS 兼容，允许电印迹后直接分析完整蛋白质。对几种市售膜的系统研究显示用聚偏氟乙烯（PVDF) 和聚丙烯（PP ) 膜能获得最好的结果。但是，使用 UV-MALDI-TOF MS 时，光谱重复 性差，信噪比（S/N ) 低，而且分辨率低。过低的 S/N 比被认为与通常在 MALDITOF MS 中使用的紫外激光（355 nm