1×PBST缓冲液，PH7.2-7.4，0.01M

常用的免疫酶染色方法

抗体法——直接法 将酶直接标记在一抗上，然后直接与相应抗原特异地结合。形成抗原-抗体-酶复合物，最后用底物显色剂显色。 (2) 酶标抗体法——间接法 *将酶标记在二抗上，先将一抗与相应的抗原结合，形成抗原抗体复合物，再用二抗(酶标抗体)与复合物中的特异抗体结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，最后用底物显色剂显色。 (a) 酶标抗体间接法的操作步骤 *标本准备： -石蜡脱蜡至水； -冰冻切片浸入4°C丙酮固定10min，0.01M PBST漂洗，5min×3； -细胞

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

为20%（V/V），4?C备用。 PBST缓冲液： 1×PBS加Tween20，使Tween20的浓度为0.1%。 封闭剂（5%脱脂奶粉）：2g脱脂奶粉，40 ml PBST缓冲液，振荡混匀，4℃备用，可重复使用1次。 转移平衡液：10ml 10×transfer buffer，20ml甲醇，70ml 三蒸水，振荡混匀。 3.2 转移 准备与胶同样大小的PVDF膜，和相同大小的8层滤纸。 3.2.1平衡 先将PVDF膜放在甲醇中平衡1分钟后（如果硝酸

免疫组化染色方法及常用抗原修复方法

、封片、镜检。 三、常用抗原修复方法 用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片：1、抗原热修复 可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液，如 TBS、PBS、重金属盐溶液等，但实验证明，以 0.01M 枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）效果最好。请选用我公司提供的 ZLI-9064 枸橼酸盐缓冲液（粉剂）配制，取该粉剂一包溶于1000ml 的蒸馏水中，混匀，其 pH 值在 6.0 ± 0.1，如因蒸馏水本身造成的 pH 值偏差，请自行调整